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2005中国消化外科学术会泌暨中日消化道肿瘤论坛 eIF4E在胆管癌侵袭和转移调控机制中的作用研究 解放军三零六医院普通外科(i00101)刘子沛 王曙光 第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所(400038) 朱瑾 熊燕 胆管癌的病例数呈逐年明显上升的趋势，而影响其治疗和病人远期生存率的主要因素是肿瘤 的转移。国内外研究表明，肿瘤转移过程中肿瘤细胞粘附、运动能力的改变，与细胞外基质问的相 互作用以及肿瘤血管形成是肿瘤浸润转移的关键环节。寻找影响转移各个步骤及各有关表型的调 控点或触发点，是探明肿瘤转移调控机制的关键。大量研究表明，蛋白质合成主要受转录水平和翻 译水平的调节。现有的相关资料表明：真核生物的蛋白台成有着相同的合成体系，在这一体系中存 在着仅在某些病理情况下才有表达量差异的调节因子。我们推测，这些异常表达的蛋白质的合成 可能在翻译水平上存在有共同的调控因素，在肿瘤转移的发生中可能起着“分子开关”式的作用。 在真核生物蛋白质合成体系中，真核生物蛋白合成始动因子4E(eukaryoticproteinsynthesis ‘illlt’lat’lOnfactor 4E，elF4E)在蛋白合成起始阶段起着重要的调节作用。近年来的研究发现，正常 情况下，elF4E水平相对较低，而在多种恶性肿瘤(头颈部鳞癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌等)中存在有 可能发挥肿瘤转移关键环节的共同调节因子作用。因此深入研究elF4E在肿瘤转移调控机制中 的作用，有可能使肿瘤转移分子机制的研究获得进展。 本课题正是基于对在肿瘤转移过程中蛋白质合成有着相同调控因素，和eIF4E在蛋白质合成 中的“分子开关”式作用的设想，以临床胆管癌组织标本和胆管癌细胞系QBC939为研究对象，研究 eIF4E在胆管癌浸润和转移中可能发挥的作用，从翻译水平上研究肿瘤转移的分子机制和调控机理。 主要研究内容与方法： 1．胆管癌组织eIF4E的表达及与临床恶性表型间关系。应用免疫组化技术观察elF4E在临 床胆管癌组织标本中的表达水平，并分析其表达水平与肿瘤的分化程度及肿瘤浸润和转移的相互 关系。 上述肿瘤转移密切相关蛋白的关系。 3．比较体外培养的胆管癌QBC。。。细胞不同转移性亚群间eIF4E表达的差异。胆管癌细胞株 QBC。高、低转移性亚群通过Transwell滤膜／人工细胞外基质侵袭筛选模型进行筛选。胆管癌细 胞elF4E蛋白表达以WesternBlot方法进行检测。 4．下调elF4E的表达对胆管癌转移相关蛋白表达的影响。运用反义寡核苷酸技术，下调 QBC。。。细胞eIF4E的表达，观察胆管癌细胞三类与肿瘤转移密切相关蛋白的重要代表物CD44， Blot方法进行检测。 结果与讨论： 胆管癌组织中eIF4E的表达均上调，且与性别、年龄及肿瘤部位无显著差异；而与肿瘤的分化 ·55· 2005中国消化外科学术会议暨中日消化道肿瘤论坛 Illl I 程度差异有显著性；与肿瘤有无浸润和转移及手术方式差异非常显著。此研究结果表明，elF4E的 过度表达可能与胆管癌的发展相关，其过度表达或许可以作为胆管癌恶性程度的一个分子标志。 胆管癌组织中CD44，MMP一9和VEGF的表达均与肿瘤转移相关，此结果与其它肿瘤的相关 的侵袭和转移中发挥重要作用。 著增强，并显示出比低转移性亚群更高的迁移和侵袭能力，结果提示elF4E的表达是体外胆管癌 细胞维持高转移表型的重要因素。 反义寡核苷酸转染后胆管癌细胞的elF4E表达明显减少，正义组无明显变化。下调CF4E的 表达后，胆管癌细胞的CD44、MMP9、VEGF蛋白合成有明显下降，正义组较之空白对照组差别不 明显。以上结果表明，elF4E在翻译中的关键性作用，使它可能通过以下环节发挥肿瘤转移的共同 调节因子作用：①elF4E高表达促进CD44的表达，可相应增强胆管癌细胞与细胞外基质的粘跗能 力，胆管癌细胞粘附能力的提高促使了癌细胞对细胞外基质和基底膜的粘附，进而促进肿瘤细胞侵 袭和转移的发生；②eIF4E作为蛋白质合成的起始阶段的“分子