藏红T二聚体作为蛋白质测定荧光探针研究.pdfVIP

第十届全固有机分析学术研讨会 藏红T二聚体作为蛋白质测定的荧光探针研究 沈含熙 罗云敬 (离开大学化学系．天律30007t) 关键词二聚体蛋白质藏红T荧光探针 ■要本文以阳离子荧光染料藏红T在阴离子表面活性荆十二烷基硫酸钠(SDs)存在F现场 形成的非荧光二聚体为基础，建立了蛋白质测定的新探针体系。对测定条件包括ST浓度、SDS浓 度、酸度、盐效应以及反应时问等进行了考察。麟浓度在o．66～33．0弘gILl范嗣内，测定BsA 该方法具有灵敏、快速、准确的优越性，用于人血清样品中蛋白质的测定，结果满意。 ， 、 ／冬 因作为肾病和肝病诊检必不可少的指标。地和屡遗冲蛋白质的定量分析具有重要意 义。目前．应用于蛋白质研究及测定的主要光谱方法有：染色法、化学发光法和荧光淬灭法。 本文以荧光染料藏红T形成的二聚体作为蛋白质测定的探针，建立了蛋白质定蟹分析的新方 法。近年来，二聚体荧光染料因在酶法分析…、生物传感器嘲和核酸分析’等生化分析领域中 的应用而备受关注。我们将这类荧光染料单体和二聚体平衡转换的性质用于蛋白质的测定， 可以获得一系列灵敏度高、线性范围宽和重现性好的蛋白质定量分析的新探针。 1 仪器与试剂 本岛津)。牛血清白蛋白(BSA，华美生物工程公司)，藏红T(ST，进口分装)。 2 实验方法 ST(5．0×10 色管中加入1．6mL Smol／L)溶液，1．6=L 强度。 3 荧光光谱特性 正)。一定量十二烷基硫酸钠(SDs)的加入使ST形成几乎无荧光的染料二聚体，当在此体系 中加入蛋白质时，荧光强度又戏剧性地回升，最大发射波长红移到536n=，最大激发波长蓝 { ～ 移至558na。 4 X10 1mol／L。 系，选取出测定BSA的最佳ST浓度为：8×10一moI／L，相应的SDS浓度为6 5 鼍佳酸度的确立 内．相对荧光强度达最大，因此选择该分析的最佳pH值为7．2～7．8。 6 盐效应的影响 臻{。脯令【蜀有机分丰斥学术{i}fi、f会 随盐浓度增人而降低。由此可地，盐的加入使BSA测定灵敏度降低。 7 共存物质的干扰 该方法测蛋白质干扰较少，葡绚糖和人部分金属离子产q：：负误差， 乙醇则有止误差，住离子干扰成分中，Mn(II)年llCo(II)的干扰最小，能允n：较人浓度存住， 酸外，其它氨基酸没有明显的干扰。 8 工作曲线的线性范围及灵敏度 龟上述虽佳试验条件-卜^，荧光强度与0．66～33．0 u C(C： gmL+蛋白质成线性响应，检测限为0．06“gmLl。测定BSA的工作曲线为F：0．10}5．03 Ll gmL1)，线性相荚系数为0．9992。 9 000 血样的测定 因该方法灵敏度高，不能直接测定血清中蛋白质的含量。取lmL稀释l ● 倍的新鲜血清样品了：IOmL比色管中，分别加入ST和SOS，r最住试验条件卜．测定。该方法 Hj丁实际血清样品的测定，得到与标准考马斯亮二兰法相接近的结果(见表L)，灵敏度明显 地