Pseudomonas+fluorescens+FS1对邻苯二甲酸二甲酯生物降解性地研究.pdfVIP

Pseudomonas fluorescensFSl对邻苯二甲酸二甲酯 生物降解性的研究 曾锋傅家谟盛国英(中国科学院广州地球化学研究所广州 510640) 杨惠芳(中国科学院微生物研究所北京100080) 邻苯二甲酸酯是世界上生产量大、应用面广的人工合成有机化合物，广泛存在于水体、 大气、土壤和生物体内，已成为一种全球性的环境污染物。目前，对水环境污染已引起世 界各国的特别关注。由于邻苯二甲酸酯的水解和挥发速率非常缓慢，生物降解是邻苯=甲 酸酯类有机污染物在环境中分解的重要途径。 从不同的栖息地中分离的微生物在好氧或厌氧条件下对邻苯二甲酸酯类有机污染物的 降解作用进行了大量的研究。研究结果表明，邻苯二甲酸酯类有机污染物的微生物降解首 先由微生物酯酶作用水解形成邻苯二甲酸单酯、邻苯二甲酸和相应的醇，邻苯二甲酸在加 氧酶作用生成3，4-二羟基邻苯二甲酸或4，5一二羟基邻苯二甲酸后，形成原儿茶酸等双酚 化合物，芳香环开裂形成相应的有机酸，进而转化成丙酮酸、琥珀酸、延胡索酸等进入三 andRibbons，1982}Nomuraeta1．，1989；Kohli 羧酸循环，最终转化为c02和H20(Eaton eta1．，1989)。在厌氧条件下，邻苯二甲酸酯类有机污染物的微生物降解反应途径研究较少， 但也可观察到邻苯二甲酸单醣和邻苯二甲酸生成后，进一步降解成苯甲酸，直至C0。和 CO。的生成。邻苯二甲酸酯类有机污染物酶促降解性的研究甚少。邻苯二甲酸二甲酯是郐苯 二甲酸酯类有机污染物的重要化合物。从处理石化厂废水的活性污泥中分离的Pseu— domonas fluorescensFSl能以邻苯二甲酸酯类有机污染物作为唯一碳源和能源生长，对邻 et et 苯二甲酸酯类有机污染物具有高效的降解作用(Zenga1．1999a；Zenga1．1999b；Zeng et eta1．1 a1．1999c；Zeng999d)。本文研究了PseudomonasfluorescensFSl对邻苯二甲酸 二甲酯的生物降解特性；确认了Pseudomonas 物降解酶的分布；指出了邻苯二甲酸二甲酯的生物降解的新途径。 1材料与方法 1．1试剂 邻苯二甲酸二甲醇(Aldrich提供)，其它试剂均为分析纯。 1．2菌种 PseudomonasfluorescensFSl从处理石化厂废水的活性污泥中分离获得，并由中国科 学院微生物研究所鉴定。 1．3培养基 0．49／ 选择培养基K2HPO。·3H20lg／L，NaCIlg／L，NH。N030．59／L，MgSOt，7HzO L，CaCl：·2H：0 0．19／L，FeCl3 富集培养基牛肉膏59／L，蛋白胨109／L，NaCI 384 广selzdomogta$flbforesctwsFSl对邻笨=甲酸_二甲酯生物降解性的研究 1．4 尸sP“矾Jmonas力“oH，5cen$FSl前悬液 Pseud。mO月“5fl“。Msf，”s ×g)10min，收集菌体，用pH7．5 pH7．50．02mc．1／1．Na。HPO。一Na[j!PO+缓冲液将菌体配成菌悬液。 1．5粗酶液 将菌悬液置于冰浴中，按图l步骤进行邻苯二甲酸酯降解酶(粗酶液)的制备(功率 200瓦．间歇超声破碎，l／2”探头)。 E翠 图l邻苯一甲酚二甲酯降解酶(罄i酶液)的制备 1．6邻苯-=．甲酸=甲酯微生物降解战验 吸取0．5rnL20％的菌悬液于含一定量邻苯二甲酿二甲酯的50raLpH7．5的无机盐培 养液中，3(I℃振荡培养。并用不加菌体的培养液进行J’对照试验。 1．7邻苯=甲酸=甲酯酶(粗酶液)促降解试验