911的测定和药后尿中原型物的检测.pdfVIP

分别以石油醚，四氯化碳，二氯甲烷和不同比例的甲醇／水分配，得到活性部位 为四氯化碳和二氯甲烷部分，四氯化碳部分经硅胶柱层析分成30个流分，活性 最高的3个流分合并，经Sephadex柱层析和HPLc制各，得到七个活性化合物 为首次从本植物中得到。 更进一步的研究工作，特别是对高活性部位的分离及所得化合物的结构和 活性测定正在进行中。 ’ 91 1的测定及药后尿中原型物的检测 夏威邓岗陈炜烨耿美玉管华诗 (青岛海洋大学海洋药物与食品研究所266003) 911是青岛海洋大学海洋药物与食品研究所从海藻中提取并经分子修饰得 到的一种低分子量海洋硫酸多糖物质，药理的毒理学研究表明911是高效、低 毒、口服易吸收的新型抗艾滋病海洋药物，已批准进入临床研究。 然而多糖类物质(尤其是新合成或新发现的多糖)的代谢研究却十分困难， 这主要是因为多糖类物质分子量大，结构复杂，在体内分布广，含量低，分离、 提取和纯化条件繁琐且特异性差，易发生多糖之问的相互干扰。目前药物代谢 研究一般采用同位素标记法、色谱法、光谱法、生物活性测定法等。同位素标 记法缺乏识别原型药物和降解产物的能力，不能准确反映体内原药浓度的变化 情况，该法也不适合人体的药物代谢研究；色谱法和光谱法应用范围较广，但 进行多糖类药物代谢研究因体内含量低，提取分离困难而受到限制，生物活性 测定法在多糖类物质的代谢研究中还未见报道。因此，任何一种新发现(或合成) 的多糖都必须通过大量的基础研究才能找到相应的方法进行代谢研究。 911的药代动力学是采用放射性同位素3H标记法进行的，但该法没有提供 药物是原型代谢的直接证据。故本研究目的在于建立911的测定方法，并于药 后在尿液中检测原型药，以作为标记法药代研究的辅助。 1仪器与药品 。1．1仪器 ； 722型分光光度计(上海第三分析仪器厂)；DU640型核酸蛋白分析仪(美国 167 DYY— (上海安亭科学仪器厂)；BIO-RAD电泳仪与制冷机(美国BIo-队D公司)l Laboratories I]I一380电泳槽(北京仪器六厂)；TITANIII型电泳膜(美国Helena 公司)。 1．2药品 911(青岛海洋大学海洋药物与食品研究所)：氯化十六烷基吡啶 (cetylpyridinium (dimethymethyleneblue。DMB，德国Serva公司)：分析纯醋酸锌(上海亨达精 细化学品有限公司)；分析纯醋酸钡(上海泗联化工厂)：硫酸软骨素 (chondrontin blue， 进口分装)，实验用其它试剂均为市售分析纯试剂。 2实验方法 2．1分光光度法定量分格911 p 取一定浓度91l标准品溶液100l，加入DMB显色剂(每升显色剂中含有 上扫描最大吸收波长。另分别配成2．5，5，lO，20，30，40，50pg／ml的911 使用液，取各浓度的使用液100p1，加入DMB显色液2．50ml，以双蒸水做空白 对照，于722型分度计上，最大吸收波长处测定吸光值，计算回归方程．于911 p 标准品使用液20g／功l中，取6次样品。依上法测定吸光值，计算变异系数。 u 取20g／ml的911标准品使用液于最大吸收波长处测定吸光值，每隔～段时间 测定一次，检验此方法的稳定性。 2．2大鼠药后尿液中原型物的检测 2．2．1动物给药与尿样收集取6只大鼠于实验室中饲养五天后，一次性 口服给药200mg／kg911，动物置代谢笼中，分别收集药前第一天和药后第一、 二、三天尿样，其问不禁饮食。将收集的大鼠尿样测量体积后分别取0．3ml， 置于-20℃冰箱中保存．其余尿样按取样时间分别混合。 2．2．2分光光度法检测尿样中总硫酸