β-半乳糖苷酶法改性甜菊糖地研究.pdfVIP

中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集·2005 B一半乳糖苷酶法改性甜菊糖的研究 李正义 卢丽丽 肖敏‘ 00 山东大学，生命科学学院，微生物技术国末重点实验室，济南，2501 rebaudiana)的叶子中提取的 甜菊糖是一种天然的强力甜味剂，它是从甜叶菊(Stevia 含8种成分的双萜糖苷的混合物川，其结构式“1如图l。甜菊昔(Stcvioside)及莱鲍迪 苷C(rebaudiosidcC)是甜菊糖的主要成分，具有较强的余苦味，在很大程度上影响了 甜菊糖的味质。比较各种改善甜菊糖口味的方法，如：酯化法、细菌微生物法、掺杂法 及酶转糖基化法口l，而修饰、改造甜菊糖分子是改善其口味的根本方法。国内报道南开 大学用葡萄糖基转移酶GT-1催化甜菊糖的转化14]。本文研究利用B．半乳糖苷酶的转糖 基活性，在甜菊糖的Rl或R2糖基部分引入半乳糖，合成具有更好味质的甜菊糖配糖体。 圈1．甜菊糖的结构式．RI和岛为糖基侧链部分．RI为H或l~2个葡萄糖基 玛为2-3个葡萄糖或葡萄糖与鼠李糖混合组成的糖苷． 产p-半乳糖苷酶菌体培养后离心收集破壁，制成粗酶液，按1：2(v／v)加入pH6．4的 煮沸离心，反应产物采用薄层层析法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)检测。 p-半乳糖苷酶的甜菊糖转糖基反应产物TLC分析结果见图2，结果显示反应体系 中只加入乳糖为唯一底物时，酶反应48小时后，部分乳糖被酶水解生成葡萄糖和半乳 糖，并发生了自转半乳糖苷反应．生成一定量的低聚半乳糖：反应体系中以乳糖为半乳 糖基供体，并加入甜菊糖为底物，反应48小时后，除了有少量的低聚半乳糖生成之外， 甜菊糖组分发生改变，在乳糖斑点上方，半乳糖斑点下方．出现新的产物斑点，非常可 能是以甜菊糖为糖基受体发生的转糖苷反应新产物；反应体系中只加入半乳糖和甜菊糖 作为反应底物，反应48小时，甜菊糖组分没有任何变化。 cn ’通讯作者，minxiao@sdu．edu 中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集·2005 图2 B一半乳糖昔酶转糖昔反应产物的TLC 1．甜菊糖、半乳糖和酶反应零时：2．甜菊糖、乳糖和酶反应零时：3．乳糖和酶反应零时： 6．乳糖和酶反应48h。 4甜菊糖、半乳糖和酶反应48h：5．甜菊糖、乳糖和酶反应48h； TLC检测条件：Merck60硅胶板．展层剂：正丁醇一无水乙醇一水(5：3：2)，显色剂：20％的硫酸 溶液+3，5-二羟基甲苯(O．5％) B．半乳耱苷酶的甜菊糖转糖基反应产物HPLC分析结果见图3。图3a显示的是甜 菊糖样品的分析结果，该样品在保留时间17．856min和56．388min处分别有一个小峰1 和一个大峰2；图3b是甜菊糖、乳糖和酶反应零时的样品分析结果。可以看到甜菊糖 的峰1和峰2及乳糖的峰3(保留时间为34．718min)：图3c和图3d分别显示的是甜菊 糖、乳糖和酶反应24h和48h的产物分析结果，可以看到，保留时间22．637min处是新 产物峰4，该峰值随着反应时间的增加，在48h达到最大，而此时甜菊糖的峰I和峰2均 基本消失。同时，反应产物中葡萄糖峰5得到积累，半乳糖峰6有少量残存。反应48h 样品经合作单位口感鉴定，认为后苦昧有一定程度的改善。 P_2) 本研究采用的甜菊糖为8种成分的混合物，采用聚丙烯酰胺凝胶(Bio-Gel 难以有效分离。甜菊糖样品的分离以及新产物的结构鉴定正在进行之中。 参考文献 朱海鹱，郑建仙甜菊糖的酶法改性中国食品添加荆20004，l：54．60． 张杨。陈天红等，甜叶菊糖的组份分离与味质改进研究进展化学通报，1998，6：1I-16 Hiroshi