几种不同进化程度动物细胞蛋白二硫键异构酶活性和含量研究.pdfVIP

几种不同进化程度动物细胞 蛋白二硫键异构酶活性及含量研究。 王秋雨 宋今丹 (辽宁大学生物系，沈阳u0036)(中国医科大学细胞生物学卫生都重点实验室．沈阳110001) 摘要使用H．1lson方法及酶联免疫技术，测定了几种不同进化程度动物细胞蛋白二硫健异构 酶的活性及其含量．结果表明，在不同进化程度的动物细胞内均有其分布，但酵活性及含量差异 显著。在高等脊椎动物肝细胞中．其含量约占细胞总蛋白的2“，酶活性约为4u／g，与低等脊椎 动物和无脊椎动物肝细胞差异显著．我们还系统比较了不同进化程度动物肝细胞的微粒体获得率 及蛋白古量，得到了不同细胞微粒俸含量明显不同，单位重量微粒体蛋白含量基本相同的结果．表 明不同细胞内质网含量不同，而单位内质同蛋白种类和含量具有一定保守性． 关键调进化动物细胞 蛋白质二硫键异构酶活性吉量 5，3， 早在1963年，Anfinsen和他的同事就分离、纯化了蛋白质二硫键异构酶(PDI，Ec 4，1)。之后的30多年，对PDI的研究不断深入。在体内它能帮助众多含有二硫键的蛋白进 行折叠和装配，由于它的存在，巯基与二硫键的交换反应增加了1000倍。通过PDI与新生免 疫球蛋白的结合、体外构建的转译系统对它的需求和酵母PDI基因的缺失，均可证明PDI在 其中各含有一个二硫键异构酶反应中心，这两个中心顺序(wcGHcK)在上述几个物种中完 细胞中也有其对应分子存在(Freedman，1995)。因此，从进化上看PDI是非常保守的蛋白。 对PDI的研究虽已取得了上述诸多成就，但对不同进化程度动物细胞PDI酶活性及含量 丑 方面的研究国内外尚未见报道。今采用Hillson(1984)方法及酶联免疫技术，测定了家兔、家 鸽、蟾蜍、鲤鱼、脉红螺等的肝细胞及一种眼虫的PDI活性及含量，并进行了比较，以期进 j ， 一步了解PDI的生物学功能，探讨PDl与内质网的关系。 1材料和方法 1．1实验材料来源 家兔0时如办g“jd蝴删i“s和蟾蜍B加弘r舭一z删s购于中国医大实验动物都．家鸽 ·辽宁省科学技术基盒资助项目． 1036 coz“m缸d嗍e“i“s，鲤鱼。妒一n“5 f口巾io、脉红螺且妒册口w”琊口为野生或养殖物种，眼虫已f— g妇nnsp．由中国科学院昆明动物研究所惠赠。 1．2试剂 PDl、RNase A、dTT、盐酸肌氨酸、SephadexG-25、Tris、酵母RNA分别购于华美生 物工程公司和BoeheingerMannheim等公司。 1．3微粒体铷备(Kainuma以矾．，1995)及含量测定 1．4细胞及微粒体蛋白含量测定 mmol／L Nacl， 将上述制备的微粒体溶解在Buffer mmol／L B中(20 Tris，pH8．o，75 o．125mmol／L蔗糖，1mm01／L 100)。采用Folin酚法(张龙翔等，1997)测不同动物细胞及微粒体蛋白含量。 1．5 PDI活性检测(T_chil‘awa，1991) 1．6 PDI含量测定 1．6．1抗PDI兔血清制备(Bjelland，1987) 1．6．2酶联免疫技术测PDI含量(章静波，199s)