基因突变检测技术与应用.pdfVIP

2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 四、加强医技的交流和沟通，建立和谐 医技关系 1．科t任要亲F}抓技术质最控制。 2．住院医生培训必需有一定时I’日J和工作量的技术训 练。 3．提高技术工作的质最医生负有指导责任 如取材是否标准、准确、组织固定是否充分，脱钙 是否完全等。 谈技术员与医生的关系 00083) 王盛兰(北京大学医学部病理系1 全文略。 基因突变检测技术及应用 004 倪灿荣(上海长海医院病理科2 33) mutation)是遗传物质的异常改变，一般是指染色体上一个位点内遗传物质的变 基因突变(gene 化，即DNA分子长链中DNA碱基对的置换、增添或缺失等改变而引起的基因结构的变化。研究表明， mutation)最为常见。 人类大部分的肿瘤几乎都存在相关基因的突变，但以单碱基突变即点突变(point 本文重点介绍常用基因突变检测技术的研究进展，常用的基因突变检测技术方法原理、操作方法和 技术特点以及在肿瘤药物靶向治疗、SNPs研究、病原微生物快速鉴定、病因学研究、法医鉴定、肿 瘤基因甲基化研究中的应用及意义，以及对提升病理诊断含金量的作用。 一、基因突变检测技术的研究进展 常用基因突变的检测是在进行了特异性基因片断的PCR扩增的基础上，然后进行单链构象多态性 分析、限制性片段多肽性分析、或直接进行DNA测序来完成的。以末端终止法为核心第一代测序技 术一化学测序方法(Sanger法)，成型于上世纪70年代末。这种方法费事费时，需要大量的技术人 3 2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 员参与，耗费大量财力。上个世纪90年代的第二代测序技术，是以集成化、自动化为基础的基因测 序技术。代表测序系统包括美国生物应用公司的ABI系列和美因通用公司的MegaBACE系列。 2007年，新一代测序技术因其在众多领域中的成功应用而得到广泛承认，2005年推出的美国454 Life 年6月也推出了自己的新一代测序仪器，该仪器将“合成测序”化学法与“DNA簇技术”相结合， 研制出“基于序列连接的化学法”的测序平台。 GSFLX系统罗氏诊断公司于2007年推出了通鼍更大、读长更长、准确性更高的第二代基因组 设备，只需要一步简单的全基因组样品制各过程，就可以在7．5小时内获得超过l亿个碱基信息。 TRUE单分子测序技术(tSMS)Helicos 行分析，对序列突变进行检测。该方法所需操作最为简便，所得样品序列的方式最为直接。 二、基因突变检测方法 (一)PC艮SSCP法 SSCP分析技简便快速，经济实用，检出率高。缺点：①不能确定基因突变的位置和类型，需要和 其他技术如DNA测序结合才能解决根本问题；②PCR—SSCP技术的突变率与靶基因片段大小密切相 关，片段超过300bp者，突变检出率大大下降。 (二)PCR—RELP法 ChainReaction PCR一限制性片段长度多肽性分析