DNA甲基化和MDS治疗研究进展.pdfVIP

全国中西医结合血液学学术会议 DNA甲基化与MDS治疗研究进展 刘 菲徐瑞荣 山东中医药大学附属医院 遗产印记、胚胎发育以及肿瘤的发生发展中起到重要作用。近来研究显示P15基因、P16基因、降钙 治疗的有效方案之一。 【关键词】DNA甲基化；骨髓增生异常综合征；甲基化研究方法；去甲基化 的深入研究在很长一段时间内进展缓慢。近年来，随着新方法的推出，DNA甲基化作用 及其与疾病(尤其在肿瘤的发生发展)的关系研究成为医学界的一个新热点。 1 DNA甲基化简介 DNA甲基化是最早发现的基因表观遗传修饰之一，DNA甲基化能关闭某些基因的活 性，而去甲基化则诱导基因的重新活化和表达。它是由DNA甲基转移酶(DNA 嘧啶(mC)的一种反应，在真核生物DNA中，5一甲基胞嘧啶是唯一存在的化学性修饰碱 基。CG二核苷酸是最主要的甲基化位点，它在基因组中呈不均匀分布，存在高甲基化、 低甲基化和非甲基化的区域，在哺乳动物中mC约占C总量的2—7％。一般说来，DNA 的甲基化会抑制基因的表达。DNA的甲基化对维持染色体的结构、X染色体的失活、基 因印记和肿瘤的发生发展都起重要的作用。 哺乳动物中，CpG序列在基因组中出现的频率仅为1％，远低于基因组中的其他核苷 酸序列。但在基因组的某些区域(通常在基因的5’端)，CpG序列密度很高，可以达均值 的5倍以上，成为胞嘧啶和鸟嘌呤的富集区，形成所谓的CpG岛【1乞】。CpG岛通常位于基 因的启动子区或是第一个外显子斟31。通常情况下，基因组正常甲基化模式为：管家基因 保持无甲基化，组织特异性基因在其不表达基因中甲基化而在其表达基因中去甲基化。当 则呈高度甲基化状态，以致于染色体螺旋程度增加以及抑癌基因表达的丢失。 2 DNA甲基化研究方法 近年来，人们越来越认识到DNA甲基化研究的重要性，也开发出一系列检测DNA 的方法。根据研究目的这些方法分为：整体水平的甲基化检测，特异位点甲基化检测和新 甲基化位点的寻找。根据研究所用处理方法的不同分为：基于PCR的甲基化分析方法， 311 全国中西医结合血液学学术会议 基于限制性内切酶的甲基化分析方法，基于重亚硫酸盐的甲基化分析方法和柱层法等14】。 PCR，MS．PCR)是现在较为常用的一种检测 而甲基化特异性的PCR(methylation—specific 方法。 基本过程是，双链DNA变性解链后，在亚硫酸氢盐的作用，单链DNA中的胞嘧啶可以 脱去氨基变成尿嘧啶，而甲基化的则不变。设计甲基化与非甲基化等位基因特异引物，随 后行PCR扩增。如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能扩增出片段，则说明该被检测 的位点存在甲基化；若用针对处理后的非甲基化DNA链的引物扩增出片段，则说明被检 测的位点不存在甲基化。 3 DNA甲基化与MDS MDS是一组不均一的造血干／祖细胞克隆性疾病，其发病机制可能涉及造血干／祖细胞 增殖与凋亡、造血微环境、免疫过程的参与、基因甲基化等多方面。MDS的发病机理、 临床演变和预后的分子机制现尚未完全阐明，尽管发现了一些分子生物学的异常，如 其出现率较低，对其意义的评价受到抑制。通常认为具有复杂染色体异常的MDS患者预 后较差。这种染色体异常伴随癌基因的积累和肿瘤抑制基因的失活，从而导致具有更强生 长优势的异常细胞克隆出来。临床上随着病情的进展，其原始细胞数量呈进行性增长，提 示一部分异常增生的克隆细胞在疾病演变中丢失了细胞周期抑制和细胞分化。近来研究显 示，在MDS患者细胞中发现多种高甲基化基因。对其甲基化的调节有望成为MDS的一 个有效治疗方案。 4 MDS相关基因的异常甲基化 4．1P15基因、P16基因 物成视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein，Rb蛋白)磷酸化，而导致某些转录因 结合，抑制CDK4和6的活性，使Rb蛋白不能被磷酸化而保持活化状态，阻止细胞由 在没有修复前过早的进入S期。故P15及P16基因及其产物是抑制细胞生长的重要途径， 特别是负