关于铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因探讨.pdfVIP

革兰阴性细菌尤其是肠杆菌科细菌感染导致慢性前列腺炎在以往文献中已有报道，随着氨苄西 林的临床应用，不久便出现产β-内酰胺酶的菌株，现在约有30%～50%的大肠埃希菌由于产酶而对氨 基青霉素耐药。根据目前报道，尽管革兰阴性菌种发现了多种酶，TEM-1 是大肠埃希菌中最主要和 最多见的酶，这种分布广泛的酶属于Bush 分类2b 组，由质粒介导，可有效地水解青霉素和窄谱头 孢菌素，但不能水解广谱的氧亚胺头孢菌素（如头孢噻污和头孢他啶）、单环菌素（氨曲南）、头霉 素（头孢西叮）和碳青酶烯类抗生素（亚胺培南），即使这些酶过度表达也不能介导细菌对上述抗生 素的耐药，但能导致细菌对酶抑制剂的耐药。 近年来，由支原体感染导致的慢性前列腺炎不断增多。根据 2004 年的支原体药敏报道，解脲 支原体对氧氟沙星具有高耐药率，人型支原体对红霉素具有高耐药率。而本实验发现，解脲支原体 对环丙沙星的耐药率（59.04%）明显高于氧氟沙星（33.8%），人型支原体对阿齐霉素、红霉素耐药 率均较高。这说明支原体跟细菌一样在抗菌药物的长期选择下，其耐药机制在不断变化，一方面天 然耐药的菌株大量增殖，同时那些原本敏感的菌株获得了新的耐药基因而表现为耐药。 由于我们是采用临床施行前列腺按摩采集的前列腺液培养，参考前列腺液常规的情况而对前列 腺炎进行诊断，受到传统培养方法的限制，或许培养出的细菌来自于前列腺以下尿道的菌群。因此， 在分离细菌以及做药敏时，充分从病人实际情况考虑，如了解病人以往感染史，感染细菌药物敏感 性情况，抗菌药物使用情况，临床病情等，才能更准确地为临床提供宝贵的信息。Magri V 和Cariani L 等提出可以用尿道拭子培养和前列腺按摩后的尿液培养以及显微镜检查来替代传统的单靠前列腺 液培养分离细菌的方法，这样既可简化临床诊断前列腺炎的步骤，也可提高准确性。 随着抗生素普遍应用以及新抗生素的开发，细菌耐药性机制也在不断发展并越来越复杂，很多 细菌呈现出多重耐药机制。因此临床医生应该以病人感染的菌谱极其抗菌药物敏感性试验为用药依 据。尽量避免因盲目使用广谱抗生素而引起的更多耐药菌株的出现，把好这一关，需要临床医生、 检验工作者和病人三方的精密合作。 铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因探讨 毛剑锋 王 伟 李彩霞 徐伟珍 丽水市人民医院 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，Pa）耐药机制的研究日益引起人们的重视，以往人 们的研究重点多侧重于对Pa 产β-内酰胺酶耐药机制的研究，而有关Pa 氨基糖苷类修饰酶基因研究 国内报道较少。Pa 对氨基糖苷类药物耐药的重要原因是产氨基糖苷类修饰酶（aminoglycoside- modifying enzymes，AMEs），目前从美国GenBank 核酸库已能检索到AMEs30 余个基因型，在革兰阴 性菌中以 aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3′′-Ⅰ、ant（2′′）-Ⅰ 等基因型为常见。为了解本地Pa 中AMEs 基因存在状况，作者采用聚合酶链反应（PCR）及序列分析 的方法对本院所分离的40 株Pa 进行了研究，报告如下。 ～738～ 1．材料与方法 1.1 实验菌株来源及鉴定 40 株Pa 均分离自我院2005 年 1月～12月间住院病人临床标本，其中 痰液34 份、尿液2 份、引流液2 份、脑脊液 1份、脓液 1份，用生物-梅里埃公司 ID 32 GN鉴定菌 株，标准菌株为大肠埃希菌（ATCC25922）和铜绿假单胞菌（ATCC27853）。 1.2 药敏试验 微量稀释法，共测试3 种氨基糖苷类抗生素，采用生物-梅里埃公司产品ATB PSE 5 药敏试验条，并符合美国临床实验室标准化委员会（National Committee for Clinical Laboratory Standards，NCCLS）2004 年版要求。 1.3 PCR 扩增模板制备 采用蛋白酶 K 消化法，挑纯培养菌落置入 0.5ml 离心管内（内已预置 200ng/ml 蛋白酶K 溶液）。56℃水浴 2h，改95℃水浴 10min。离心 15000r/min30s，移液器吸取上 清液移入另一新的0.5ml 离心管作为模板液置入-20℃冰箱备用。 1.4 AMEs基因检测 采用聚合酶链反应（PCR），各种靶基因引物序列和目的产物长度见表 1。各种 靶基因PCR 扩增体系均为：每