不同时期NDV地方株F基因的克隆及序列分析和基因型研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会论文集 不同时期NDV地方株F基因的克隆及 序列分析与基因型研究 程相朝，，李银聚1，吴庭才t，张春杰1 (1．河南科技大学动物科技学院．河南洛阳47 1003) 摘要：利用RT—PCR技术，对1998～2002年问洛阳地区的薪城疫典型发病禽群中所分离到的15个地方毒株的F 基因主要功能区片段进行了克隆和序列分析，并根据其47～435位核苷酸序列构建了系统进化树，确定了其毒力强弱 和基因型。结果显示：依据核苷酸和推导的氨基酸同源性的不同，15个地方毒株可分为明显的三群，群内各毒株同源 性较高，群问差异较大，未发现有因分离禽品种不同而引起的明显株闻差异。其中第一群9株，涉及到各时间段分离的 毒株和所有分离禽品种，属典型的基因Ⅶ型强毒株，高度集中于进化树的基因Ⅶ型c亚型区；第二群4株，属传统的基 因Ⅵ型强毒株，分散于进化树的基因Ⅵ型区；第三群包括2株，属古典基因Ⅱ型的弱毒株。分散于进化树的基因Ⅱ型区。 综合说明近年来本地区流行的新城疫病毒以额的基因Ⅶ型为主，同时兼有传统的基因Ⅵ型和古老的基因Ⅱ型；并提示 基因Ⅶ型各毒株在本地区流行时间较短，株阂差异不大。 关键词：鸡新城疫病毒；F基因；序列分析；进化树；基因型 随着近年来分子生物学技术的发展与成熟，人 同一时期或不同区域的鸡群中同时流行多种不同 们从分子流行病学角度将引起禽类新城疫(New—基因型的毒株，这给新城疫的防制带来了很大的困 castle Disease，ND)流行的病原体新城疫病毒(New—难。因此，为了更好地作好本地区新城疫的防制工 castleDisease Virus，NDV)分为9个基因型，并证实作，本试验在对1998—2002年间从河南省洛阳地 上世纪30一50年代世界上ND大流行主要由基因区不同家禽中分离到的15个NDV代表毒株的F Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型毒株所致；60年代的大流行主要由基 基因进行克隆和序列分析的基础上，构建了地方流 因Ⅳ和V型毒株所致；70年代末的大流行，主要由 行株的系统发育进化树，确定了它们的基因类型， 基因V和Ⅵ型毒株所致；80年代的流行主要由基 并初步探讨了本地区NDV分子流行病学的特点， 因Ⅵ型毒株所致；而90年代以后的流行则主要由 从而为针对性防制措施的制定奠定了基础。 Ⅶ型毒株所致。但我国和欧美等发达国家在特定时 1材料和方法 期流行特定基因型NDV的情况不太一样，往往在 1．1 茵种、质粒和试剂JMl09工程菌购自洛阳华 美生物工程公司；PMDl8-T载体购自大连宝生物 193) 基金项目：河南省青年骨干教师资助项目(2001 l 作者简介：程相朝(1966一)，男，河南汝州人，博士，教授， 工程公司。入DNA／HindI!I+EcoRMarker，限制性内 主要从事动物免疫学的教学和科研工作． 切酶(Hind瑶和XbaI)、病毒基因组RNA提取试 {姥乖{强#{‰密出舔幽窜出界出{；出：察÷!≈行出幂出簪也尔出乖出幂出界出希出棼出希出{沾希避矫她督池毋出乖出i心旆出乖幽秘场科，席如秘翰湛袜幽社翰湛舔幽秘场觯旆砖冰幽祜％≈逆冻 增效率一致，将病毒鸡胚尿囊液稀释至l∥亦能检 立方法特异性强。由予NDV的F基因易发生点突 测到目的RNA。 变，所设计的引物能否完善，还有待进一步扩大试 核酸检测技术的关键在于引物的特异性。序列 验加以验证。 分析表明AIV引物高度保守，证实了应用该引物检 测AIV的可行性。对山东省不同年代分离的16个参考文献【略】 NDV强毒株和6个弱毒株的验证结果亦表明所建 一110一