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qRT．PCR检测胃癌中miRNAs的表达 陈熙，聂玉强． 广州医学院附属广州市第一人民医院消化内科，广州市消化病重点实验室研究 背景 mi砌妊属于调节l球A或核糖核酸调节子，miRNA在转录后水平调节特定靶基因mRNA的 表达，从而参与生命过程中的一系列重要进程，甚至是肿瘤的发生。多个实验和临床分析证 明miRNA可以调节癌基因和力或抑癌基因，从而发挥促癌或抑癌作用。很多国外及国内学者 对miI斟As在肿瘤中的表达情况，及对肿瘤的发生、发展、分期、药物治疗和预后等方面 开展了相关的研究工作。但是对胃癌中miRNAs的表达情况进行系统的研究还匮乏。 我们前期工作是应用miRNA基因芯片(Illumina公司)分析7例经病理确诊为胃腺癌，以 及及同个病人距离胃癌病灶5cm以上癌旁组织的miRNA表达。包括下列步骤：提取总RNA、 RNA多聚腺苷酸化、双链cDNA合成与纯化、PCR扩增、芯片杂交及数据处理、并使用相 关的数据分析软件，比较胃癌和癌旁组织中miRNAs的表达情况，芯片结果显示有9个 hsa-miR-21·，hsa-miR-27a，hsa-miR-584，hsa-miR-93)。 目的 前期研究中已发现胃癌组织存在差异性miRNA表达谱，本研究将扩大样本量，用定量 RT-PCR验证芯片显示胃癌中高表达的4个miRNA表达情况；同时设立其他无胃癌患者且 内镜诊断为慢性浅表性胃炎(CSG)者组成对照组，对比目标miRNA在胃癌、癌旁及CSG 中表达情况；使用相关的数据分析软件预测其靶基因；为下一步研究该miRNA的靶基因 及KEGG通路与胃癌的发生、发展和预后的相关性的研究奠定基础。 方法 l、从新鲜冰冻标本库中取出50对胃癌及癌旁标本，25例CSG活检标本提取总RNA，并 逆转录成cDNA进行后续的实验。根据miRNA数据库和相关文献，查询人类miRol8la、 Green 以上的癌旁组织及CSG病人中的表达情况。 2、为了明确差异表达的miRNAs与胃癌临床病理因素的关系，将已验证的miRol81a和 miR027a的表达水平与患者年龄、性别、病理分型以及有无淋巴结转移进行了统计分析。 法均预计的靶基因作为候选靶基因；采用KEGG通路数据库分析靶基因的l汪GG通路。 结果 号秩检验显示，相对于癌旁组织，miR-181a及miR-27a在胃癌组织中均有统计学意义上的 胃炎组织，miR．18la和miR-27a在胃癌组织中为高表达(p=O．00)。 第142页 2、miR．181a和miR一27a的表达水平与胃癌患者年龄、性别、病理分型以及有无淋巴结转移 均没有统计学差异。 因分别参与了11及15个KEGG途径，包括了人类代谢途径、代谢作用、遗传信息处理、 环境信息处理、细胞进程和有机体系等分子的相互作用和反应网络。 结论 1、通过应用荧光定量RT．PCR技术证实miR-181a和miR．27a在胃癌中为高表达。 2、miR-181a和miR-27a的表达水平与患者年龄、性别、病理分型以及有无淋巴结转移均没 有统计学差异。 3、预测miR-181a和miR-27a的靶基因及KEGG通路。 5一羟色胺转运体基因启动子区多态性与肠易激综合征 常媛嫒 天津医科大学总医院300052 目的：旨在研究5．羟色胺转运体(SERT)基因多态性对SERT表达、下游基因转录的影响 并探讨与临床肠易激综合征(IBS)症候群和精神心理症状的关系。 并取健康对照120例： 的扩增，琼脂糖电泳分析5-HTrLPR多态性，并分析5-HTTLPR多态性与IBS的关系。 第二部分：应用PCR扩增包含5-HTrLPR多态性等位基冈的启动予区，应用荧光素酶 报告基因检测系统研究该启动了对下游基冈转录水平的影响和调控。 第三部分：从结肠粘膜组织中提取SERT蛋白，通过Westernblot检测SEI玎蛋白的表 膜SERT蛋F1表达最的关系。 第四部分：应用精神心理症状自评最表(SCL．90)及症状积分对所有研究对象进行研 究，并与SERT基因多态性、SERT表达、启动予功能做相关性分析。 结果： C．IBS组L／L频率显