一株对3种碳青霉烯类抗菌药物均耐药的肺炎克雷伯菌耐药机制研究.pdfVIP

检验医学２０１４年４月第２９卷第４期　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｐｒｉｌ２０１４，Ｖｏｌ２９．Ｎｏ４． ·３６９· 文章编号：１６７３８６４０（２０１４）０４０３６９０６　　中图分类号：Ｒ４４６．５　　文献标志码：Ａ　　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３８６４０．２０１４．０４．０１６ 一株对３种碳青霉烯类抗菌药物均耐药的 肺炎克雷伯菌耐药机制研究 解春宝，　喻　华，　肖代雯，　杨永长，　姜　伟，　刘　华，　黄文芳 （四川省医学科学院·四川省人民医院检验科，四川 成都６１００７２） 　　摘要：目的　研究临床分离的一株肺炎克雷伯菌（Ｋ３０）对碳青霉烯类抗菌药物耐药的机制。方法　采用琼 脂稀释法测定肺炎克雷伯菌Ｋ３０对１３种抗菌药物的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）；用改良Ｈｏｄｇｅ试验检测碳青霉烯酶； 聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测Ａ类碳青霉烯酶（ＫＰＣ）、Ｂ类碳青霉烯酶（ＮＤＭ、ＩＭＰ、ＶＩＭ、ＳＩＭ）、超广谱 内酰胺酶 β （ＥＳＢＬｓ，ＣＴＸ、ＴＥＭ、ＳＨＶ）、头孢菌素酶（ＡｍｐＣ，ＦＯＸ、ＥＢＣ、ＡＣＣ、ＤＨＡ、ＣＩＴ、ＭＯＸ）基因和 类整合子；实时荧光定 Ⅰ 量ＰＣＲ分析肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因ｏｍｐＫ３５、ｏｍｐＫ３６的ｍＲＮＡ表达；利用质粒接合试验研究肺炎克雷伯菌 Ｋ３０耐药基因的水平传播能力。结果　药物敏感性试验显示，肺炎克雷伯菌Ｋ３０对包括碳青霉烯类抗菌药物在 内的１１种抗菌药物均耐药，仅对头孢西丁钠中介，对阿米卡星敏感。肺炎克雷伯菌Ｋ３０的改良Ｈｏｄｇｅ试验为阳 性。ＰＣＲ扩增Ａ类碳青霉烯酶基因ＫＰＣ和２种ＥＳＢＬｓ基因ＣＴＸ、ＳＨＶ为阳性，其ＰＣＲ产物经测序后同ＧｅｎＢａｎｋ 数据库比对证实分别为ＫＰＣ２、ＣＴＸＭ３和ＳＨＶ３８。其余耐药基因和 类整合子扩增均为阴性。与肺炎克雷伯 Ⅰ 菌（ＡＴＣＣ７００６０３）相比，膜孔蛋白基因ｏｍｐＫ３５、ｏｍｐＫ３６的表达没有降低。质粒接合试验未成功获取结合子。结 论　临床分离的一株对碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌主要耐药机制与产Ａ类碳青霉烯酶ＫＰＣ２合 并产ＥＳＢＬｓ有关，且ＫＰＣ２可能不由质粒介导。 关键词：碳青霉烯酶； 类整合子；膜孔蛋白；质粒接合试验；肺炎克雷伯菌 Ⅰ 　　 Ｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆａｎｉｓｏｌａｔｅｏｆＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏ３ｋｉｎｄｓｏｆ ｃａｒｂｏｐｅｎｅｍｓ　ＸＩＥＣｈｕｎｂａｏ，ＹＵＨｕａ，ＸＩＡＯＤａｉｗｅｎ，ＹＡＮＧＹｏｎｇｃｈａｎｇ，ＪＩＡＮＧＷｅｉ，ＬＩＵＨｕａ，ＨＵＡＮＧＷｅｎｆａｎｇ．　 （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＳｉｃｈｕａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓａｎｄＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＰｅｏｐｌｅ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌ， ＳｉｃｈｕａｎＣｈｅｎｇｄｕ６１００７２，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｎｉｓｏｌａｔｅｏｆＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（Ｋ３０） ｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｃａｒｂｏｐｅｎｅｍｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｍｉｎｉｍｕｍｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（ＭＩＣ）ｏｆＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＫ３０ｔｏ１３ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙａｇａｒｄｉｌｕｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．ＭｏｄｉｆｉｅｄＨｏｄｇｅｔｅｓｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｃａｒｂｏｐｅｎｅｍｓ．ＣｌａｓｓＡ ｃａｒｂｏｐｅｎｅｍ（