牛血清白蛋白-β-环糊精毛细管柱用于毛细管电色谱手性分离探究.pdfVIP

牛血清白蛋白一p一环糊精毛细管柱用于 毛细管电色谱手性分离研究 戴荣继’*咚斌2唐力’邓玉林 ‘ 1北京理工大学生命科学与技术学院，2北京理工大学材料科学与工程学院 本文研究了牛血清白蛋白一a-环糊精键合毛细管柱在毛细管电色谱中用于色氨酸、苯丙 氨酸、扑尔敏、布洛芬、阿托品、山食蓉碱、阿替洛尔、异丙嗓的手性拆分，其中色氨酸、 苯丙氨酸、扑尔敏和布洛芬得到了一定的分离，考察了多种因素对分离结果的影响。 1.电色谱中电流 ((1)与电压 (功 的关系 逐渐加电压，观察电流随电压的变化。通过实验测得的数据可知若电流与电压的关系成 线性，说明在此范围内均适合进行测定。我们选择的所加电压范围是一lOkV--20kV。在所选 的电压范围中，电流值与电压值基本上呈线性关系，所以在此范围内进行侧定，线性以上的 电压，焦耳热效应过大，不宜选用。 2.缓冲溶液pH值对分离的影响 本实验使用的是牛血清白蛋白p·一环糊精涂层毛细管，牛血清白蛋白仍保持有一定的活 性，所以在pH值的选择上，除了参考文献以外，还特别主意不使蛋白质遭到破坏，因此选 择在弱酸性的条件下进行实验，pH值的范围在3.5-7.0之间，在所考虑的pH值范围内电 渗流始终由正极流向负极，pH值对分离度的影响主要取决于分析物质本身的分离情况，以 及固定相表面电荷的变化。本实验考察了随着pH值的变化，手性物质分离度的变化。表1 列出了各个物质的分离情况。 表1使用不同pH值缓冲溶液的分离情况 pH值 药物名称 3.5 4.0 5.0 6.0 7.0 Rs a Rs a Rs a Rs a Rs a 色氨酸 0.71 1.34 0.30 1.10 苯丙氨酸 0.62 1.45 扑尔敏 1.41 1.86 0.78 1.46 0.46 1.41 布洛芬 0.55 1.13 0.70 1.11 0.37 1.22 从表1可以看到，获得分离的对映异构体的分离度随着缓冲溶液pH值的变化而变化， 一般都有一个能够获得最佳分离度的pH值。色氨酸在pH=4.0时达到最佳的分离度Rs= 0.71，随着pH值的升高，分离度逐渐降低;苯丙氨酸在本实验中仅在pH=3.5时能够获得 一定的分离;扑尔敏的分离度随着pH值的升高而降低，在实验所用的最低pH值下的分离 度最大为1.41;布洛芬的分离最佳pH值则在5.0，分离度为0.700 国家自然科学基金资助课题 848 从数据中可以看出各个对映异构体所能够达到最大分离度的pH值都比较小，pH小于 5.0，当pH值大于5.0后就不能得到分离，原因是由于固定相是具有多作用点的环糊精衍生 化蛋白质，能与对映异构体之间形成多种作用力，在pH值较小时，对映异构体发生质子化， 与固定相之间氢键与静电作用力相对比较大，所以分离效果较好，而随着缓冲液的pH值的 升高，对映异构体逐渐呈电中性，氢键与静电作用力相对减小，从而导致分离变差。 3 电压对分离的影响 对映体的选择性大小与电场的大小有着密切的关系。本实验选择在一lOkV--20kV的范 围内进行测定。固定20mmol/L的磷酸盐缓冲液 (pH=3.5),O.1mP的柱压，210nm检测 波长，对扑尔敏进行改变电压的分离实验，固定20mmol/L的磷酸盐缓冲液 (pH=4.0), 0.IMP的柱压，214nm检测波长，对色氨酸进行改变电压的分离实验。图1为色氨酸在不同 电压下的分离图。 确 胭 卿 朋 助 知 初 助 ，