金电极上单链DNA和其杂交后的表面增强拉曼光谱研究.pdfVIP

金电极上单链DNA及其杂交后的表面增强拉曼光谱研究 董平，吴玲玲，周剑章，董丽琴，包烨，林仲华 固体表面物理化学国家重点实验室，厦门大学化学系 厦门大学物理化学所，厦门361005 DNA分子在电极表面的固定和杂交的表征方法近年来一直是生物芯片研究领 域的基础和热点。许多检测技术诸如:红外，紫外，荧光，X射线衍射技术，核 磁共振技术以及电化学技术都为这一领域的研究提供了很多有用的信息。本文采 用表面增强拉曼散射光谱技术(SERS)，用散焦的采谱方法对电极表面键合的单链 DNA及其杂交后的双链DNA进行了检测，证实了单链DNA在金电极表面的固定， 并得到单链 DNA杂交前后拉曼光谱上的变化，同时对双链 DNA与钻邻菲锣琳 (Co(phen),,)配合物的作用机理作了初步的探究。 金电极的粗糙化按文献[1]所述方法进行，然后将带疏基的单链DNA(HS-ssDNA) 通过Au-S键固定到粗糙化好的金电极表面[(z)，得到的ssDNA电极用大量的三次水 反复冲洗后浸泡在三欢水中备用。ssDNA与其互补链DNA的杂交是将固定有ssDNA 的金电极置于含有0.07mg/RL的互补链DNA的杂交缓冲液中(pH=7.0),振荡并水 浴控温600C,1.5小时后取出，用大量的三次水反复冲洗表面，即获得双链DNA (dsDNA)金电极。dsDNA与金属配合物Co(phen)3相互作用的SERS研究是将上述 处理好的dsDNA金电极置于10umo1/LCo(phen)广的Tris-HC1缓冲液(lommol/1 Tris-HC1,10mno1/1NaCI)中室温下浸泡2小时，取出电极用大量的三次水反复 冲洗，用氮气吹干后，采集其SERS谱图。 上述三种电极所获得的SERS光谱如图1所示，曲线a和b分别为ssDNA和dsDNA 在金电极上的SERS谱。可以看出它们在1001crri,1040cm,1079cm,1582cm, 1700cm，等附近有共同的谱峰，其中1079cm是DNA磷酸骨架上叽一的伸缩振动峰， 1700cm为‘碱基上C=0的伸缩振动峰，都是DNA的特征振动带，它们的出现证实了 DNA在金电极上的固定。另外，1001c记也是磷酸骨架引起的振动峰，1582cm为 A或胸腺啼绽碱基G的C=C或C=N键的伸缩振动峰。除了上述共同的谱峰，还可明 显看到DNA杂交前后在两个位置引起明显的谱峰移动，一个是730cm附‘近由A碱基 的环呼吸振动产生的谱带，杂交后移向低波数735cm附近，说明杂交后碱墓间形 成的氢键使A碱基环的振动产生了变化;另一个是826cm附近由OP05’一的伸缩振 动产生的谱带，杂交后移向低波数804cm-，附近，可能是由于杂交后互补碱基对之 间通过氢键相互作用影响了磷酸骨架上某些键的强度。 图I中的曲线。为dsDNA在Co(phen),溶液中浸泡2小时后彻底冲洗过得到的 SERS谱，1423和1452cm，的两处强峰为Co(phen),’的特征峰.由于SERS实验前己 经用三次水浸泡电极2小时后用大量三次水冲洗，在这样的情况下仍然能检测到 Co(phen),Z的存在，说明dsDNA和Co(phen)3间具有较强的相互作用.另外，从图 工 J 中可以看到，由于Co(phen)9+的存在，dsDNA中由A碱基的环呼吸振动引起的735cm 创 叭 一 拉曼谱峰移到729c耐附近，这说明dsDNA和Co(phen)3间具有较强的相互作用， 且Co(phen),与dsDNA间的作用位点可能与A碱基有关;磷酸骨架的OP05’伸缩 振动峰由dsDNA的804cm，附近的谱