犬17A+STR+5色荧光检测试剂盒在警犬DNA鉴定中的应用的研究.pdfVIP

·570· 第七部分 水生动物及其他 ●-●_●--__-____●--_●______-●●-_一El IIIII III I--●-●-●_●__■●■_●______● 犬17ASTR 5色荧光检测试剂盒 在警犬DNA鉴定中的应用研究 叶俊华1，杜蔚安2，杨前勇p，唐小玲2，郑卫国2，熊勇华3，赵会安‘，付平峰1， 兰康1，王博1，徐黎1，马长书1，李涛1 (1．公安部南昌警犬基地，江西南昌330100；2．无锡中德关联生物技术有限公司，江苏无锡214174； 3．南昌大学中德联合研究院，江西南昌 330047；4．江西省公安厅刑科所．江西南昌330008) 引言 犬STR-DNA多态性的研究在国外比较广泛深入，现已定位和测序了的sTR达3700多个，遍布整个基因组。 警犬种犬的血统管理方面采用了这一技术，并初步建立了全国警犬种犬DNA数据库，对警犬的良种繁育具有重要 意义。目前，我国开展犬的STR—DNA多态性研究、构建数据库及进行犬的亲缘关系鉴定多采用美国ABI公司生产 的试剂盒，但由于进口试剂价格昂贵，且供货不畅，同时，该试剂还存在基因分型困难等问题，因此。很有必要开发 研制具有自主知识产权的犬sTR检测试剂盒。本研究利用本课题组自主研发的犬17ASTR荧光检测试剂盒，建立 警犬亲子鉴定方法，还可应用于DNA辅助选配、遗传多样性评价以及犬类法庭科学DNA鉴定等。 材料与方法 以23l头纯种犬，包括德国牧羊犬、罗威纳犬、杜伯文犬、史宾格犬、拉布拉多犬、昆明犬、马里努阿犬、荷兰牧 羊犬8个警用犬品种和藏獒、沙皮犬、苏格兰牧羊犬3个非警用犬品种，共计“个品种的个体为样本。使用ABI Prism@3130型遗传分析仪(36em毛细管、POP-7胶)进行电泳分析。运行GeneMapperv3．2．1软件进行分析和判型。 结果 通过对231例样本的检测，16个STR基因座共发现145个等位基因，平均每个基因座9个，最多的等位基因数 记录一致，表明该基因的检测要求符合预期，能应用到性别检测研究中。 Discrimination 16个STR基因座的累积鉴别力(Total tire of ProbabilityPaternityExclusion，CP)为o．995026。 讨论与结论 为减少对国外试剂盒的依赖性，节约国家外汇支出．提高检验准确性，开展犬DNA检验试剂国产化研究十分 必要，2009年本项目成功研制出涵盖17个基因座，5种荧光的犬STR荧光复合扩增检验试剂盒，建立了有效的犬 sTR检验技术。 本方法可对血斑直接PcR检测。免去了DNA提取步骤，操作更加方便、快捷，大大缩短了检测周期，降低了检 测成本。本研究通过STR复合扩增反应体系中加入能够稳定DNA单链状态的ssB和维持DNA聚合酶热稳定性的 BSA，并摸索两者最佳的反应终浓度，以消弱或去除PCR抑制剂的影响，达到应用犬17ASTR荧光复合扩增体系对 滤纸血斑直接扩增的目的。 STR的分型易受到菲特异性带、波峰重叠、等位基因漏扩、扩增不平衡、影子峰等很多因素的干扰，有的分形峰 虽然有读数也不一定就是真正的等位基因。尤其是存在微变异的情况下，这种干扰就更加明显，如FH2132，存在多 个微变异，其分子量甚至相差1个碱基。因此，本研究迫切需要进一步设置等位基因标准物，建立判型标准，使检测 更加标准和规范。 关键词：犬；STR检测试剂盒；DNA鉴定 ·通讯作者，E-mail：y呵a唱100@si肌∞m。