人参皂甙Rb3抗缺血缺氧性脑损伤与其机制的研究.pdfVIP

人参皂甙Rbs抗缺血缺氧性脑损伤及其机制的研究 沈洪妹张志军江山姜正林 (226001 江苏南通，南通医学院航海医学研究所) 缺血缺氧是危害人类健康的常见病因，缺氧或缺血可引起脑损伤。在缺血缺氧性脑 损伤防治方面，目前还缺乏疗效令人十分满意的药物。因此，研究与开发抗脑缺血缺氧 药物、保护脑组织具有重要的意义。人参是我国中医药中的宝贵财富，已有数千年的药 用历史。人参皂甙是其主要的生物活性成分。通过对人参皂甙药理作用的研究，发现它 们能减轻动物脑组织缺血一再灌注性损伤；能减轻海马组织和培养的海马神经元的缺血 缺氧性损伤作用。但这些研究一般都是使用的人参总皂甙或人参二、三醇组皂甙，它们 是多种单体的混合成分，其作用的强弱和其所含单体的种类及含量有关，丽各种单体成 分的含量受药品来源及生产批次的影响。因此，开展对人参皂甙单体的研究显得极为重 要。本研究室发现，人参三醇组单体的Re、Rg，、R92、RhnF。-及人参二醇组单体的Rb。 Rb。、Rd、R112有神经保护作用，其中人参皂甙Rb。抗缺血性脑损伤作用最强。本实验旨在 这一基础上对人参皂甙Rba的抗脑缺皿作用及相关机制作深入研究。 一、材料与方法 1．药物及动物：人参皂甙单体Rb。为粉剂，纯度达到99．5％以上，由吉林大学基础医 学院有机化学教研室提供。实验动物由南通医学院实验动物中心提供。 2．缺氧存活时间实验：取56只ICR小白鼠，体重(20±1)g，分为对照组与0．5、1、 3、5、10、20mmol／L用药组，雌雄各半。缺氧前lh分别给小白鼠腹腔注射生理盐水和 不同浓度的Rb。溶液，每只0．2ml。缺氧时将小白鼠放于150ml密闭三角烧瓶内，瓶内预 先加入109钠石灰，以吸收c观。观察三角烧瓶密闭后至小白鼠死亡(以呼吸停止为准) 的时间，即缺氧存活时间。 3．离体海马脑片实验：相关材料与方法见我们以前的研究报导。记录到的OPS波 形稳定15min后，取OPS大于3mY的脑片作模拟缺血实验。缺血时将灌流液改为经 95％N。一5％C0：混合气体饱和的无糖ACSF，14min后恢复供氧供糖。用药组实验时，将人参 皂甙单体Rb。直接溶于ACSF中，用药从缺血前15min开始，一直至恢复供氧供糖15rain injurypotential，HIP) 为止，共持续用44rain。观察指标有：①缺氧损伤电位(hypoxic 发生率：出现HIP的脑片占脑片总数的百分比。扈)OPS恢复幅度：恢复正常脑脊液灌流 134 lh后OPS波幅与初始OPS波幅之百分比，OPS波幅恢复至缺血前水平60％以上的脑片定 为恢复。③oPS恢复率：OPS恢复的脑片占脑片总数的百分比。 4．组织化学实验：1)主要试剂及溶液：还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸四钠盐 buffersaline)：N削P0‘·12}120 (phosphate 3．229／L，NaI{2P04·2}120 0．1569／L，NaCI X-i00 0．5％。 2)动物分组：取SD雄性大自鼠，体重(200±20)g，分为五组：正常组、缺氧组、 缺氧复氧组、用药+缺氧组、用药+缺氧复氧组。 3)缺氧等处理：将大鼠放入低压舱，舱内压力相当于海拔8000m的空气压力(270mmHg。 氧复氧。用药的动物分别于入舱前24h、入舱前lh腹腔注射9．3mmollL的Rba溶液，每 只iml，其他动物给等量的生理盐水。 4)组织切片的制备：动物在复合麻醉剂麻醉下开胸，经左心室向升主动脉灌注生 理盐水150ral，随后用4％的多聚甲醛450mi灌注固定，总灌注时间1．5h。然后取脑，继 续固定2h，再移入30％的蔗糖溶液中，等组织块沉底后，作冰冻横断切片，厚30l±m。 隔四取一，用0．01mmol／L的PBS接片。 Tritos 5)染色方法：采用NADPH-