枯草芽孢杆菌发酵生产纤维素酶地研究.pdfVIP

中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集2·005 枯草芽抱杆菌发酵生产纤维素酶的研究 柳建设 肖利 夏乐先 谢景洪 (中南大学资源加工与生物工程学院，长沙41008月 摘 要;本文研究了发醉时间、接种量、碳源、氮源、无机盐等因素对枯草芽饱杆菌发醉生 产纤维素酶的影响，并对工艺参数进行了优化试验。结果表明，鼓皮和蛋白炼分别是最佳的 碳源和氮源，它们对发醉产酶的影响最明显;无机盐的最佳水平为:磷酸氢二钾0.3%，七 水硫酸镁0.05%.抓化钙0.06%:适宜的其他发醉条件是:发醉时h3--4天，接种as%, 装液盈80m1左右。以优化试验的结果为根据，又进行了初步的发酵锡试验，测定了酶活随 发醉时间的变化情况及发醉峪中最大酶活力。 关键词:枯草芽袍杆菌 纤维素酶 发醉 1，引言 纤维素是自然界中十分丰富而没有得到充分利用的可再生资源。纤维素的转化分为 化学降解和生物降解，因为化学降解可能造成环境污染，所以微生物对它的降解成为自 然界中碳素转化的主要方法11,21。因此，寻求对纤维素降解能力强的微生物纤维素酶是 非常必要的。 伴随着地球亿万年的进化，出现了众多能降解纤维素的微生物，如真菌、细菌和放 线菌等。目前用于生产纤维素酶的微生物主要有:产黄纤维素单细胞菌，嗜热纤维素梭 状芽抱杆菌、弯曲高温单细胞菌、耐热性嗜热侧抱、生死热毛壳、镰刀霉和黑曲霉等。川. 生产纤维素酶的原料包括数皮、秸秆粉、废纸、玉米粉和无机盐等71-101 我国是一个饲料资源十分紧张的国家，人多地少，人畜争粮的矛盾相当突出，要保持 我国畜牧业的持续发展.必须解决好饲料问题。用枯草芽抱杆菌纤维素酶降解秸秆来生 产秸秆饲料，是一类高效、无毒、无副作用的环保型 “绿色”饲料，在21世纪将有十分 广阔的应用前景[11气 2.实验材料和方法 2，I菌种 本试验采用的菌种为枯草芽抱杆菌，取自中南大学资源加工与生物工程学院生物工 程系实验室。 2.2纤维素酶活力的测定12〔,;1 2.2.1测定原理 酶的含量不能用重量或体积来表示，只能用它来催化某一特定反应的能力即酶活性 或酶活力来表示。测定酶活性就是测定酶催化的化学反应的速度，并以单位时间内产物 的增加量来表示。本文利用DNS试剂在碱性条件下与还原糖共热，发生变色反应来确 定纤维素酶生成速度。 2,2.2酶活力单位的定义 在规宁条件下.每分钟催化纤维素分解生成Iumol葡萄糖所需要的纤维素酶量为一 中国资源生物技术与据工租学术研讨会论文集 2·005 个活力单位 (IU)。实验中所测酶活均为Iml粗酶液的酶活，即单位为u.mr. 人了xn 酶活力计算公式: u = 一 5 式中，u为酶活，M为从标准曲线中查出的葡萄糖浓度，n为Iml粗酶液的稀释倍 数:5为酶与底物保温反应时间5min. 3.试验结果与讨论 3.1单因素对发醉产酶的影响41，〔Jjs 3.1.1产酶培养基最佳发酵时间的确定 该实验研究了四种不同培养基发醉Id.2d.3d.4d.5d后的产酶情况，四种的培 养基成分如表3.1所示。 培养基编号 培养荃组成 可溶性3i米粉0.5%,淀粉0.5%.NaCI5%.W00.. 1%;MgS47H,00.020.03%;硫酸按 0.3%. 数皮。.5%;蛋白膝0.5%;NaC15%.I0I,POA1%;MgS0}7H,00.02`0.03%;硫酸按0.3%. 蛋白陈0.5%;可溶性淀粉0.5%;NaCI5%.BH,P0.0.1%;MgS0..7H,00.02-0.03%;硫酸按 0.3%. 可溶性淀粉0.5%;醉母漫粉0.5%;NaC15%.MP0.0.1%;MgS0..7H,00.02-0.03%;硫酸 按 0.3%. 即 即 飞 E . 加 n 、