吴茱萸挥发油单次给药对小鼠肝毒性“量-时-毒”关系的研究.pdfVIP

吴茱萸挥发油单次给药对小鼠肝毒性“量-时-毒”关系研究 1 1* 1 2 2 黄伟 ，孙蓉 ，吕丽莉 ，王会 ，鲍志烨 （1．山东省中医药研究院，山东 济南 250014 ；2 ．山东中医药大学，山东 济南 250355 ） [摘要] 目的: 研究吴茱萸挥发油组分单次给药致小鼠肝毒性的时毒、量毒关系。方法: 取小鼠按不同时间 点和不同剂量分组给药，观察小鼠死亡情况和毒性反应，检查血清谷丙转氨酶（ALT ）、谷草转氨酶（AST ）， 计算肝、脾、胸腺脏器指数，光学显微镜下观察肝组织形态变化。 结果: “时-毒”关系研究表明：小鼠单 次灌服 1.35 ml/kg 的吴茱萸挥发油后，血清ALT 、AST 值随时间不同均造成肝损害程度也不同，均可导致 肝脏指数明显升高, 小鼠血清 ALT 、AST 均在给药后 6 h 达到高峰；肝组织病理学检查显示，吴茱萸挥发 油可在给药 8～72 h 内对肝组织产生明显损伤。“量-毒”关系研究表明：与正常组比较，吴茱萸挥发油不同 剂量组对肝组织产生不同程度的损伤，且随着剂量增大，ALT 、AST 升高显著，呈剂量依赖关系。结论: 小 鼠单次灌服吴茱萸挥发油可造成小鼠一定的急性肝损伤，其对肝损伤程度呈现有一定的“量-时-毒”关系。 [关键词] 吴茱萸；挥发油；单次给药；肝毒性；“量-时-毒”关系 吴茱萸为芸香科植物吴茱萸（Evodia rutaecarpa （Juss ）Benth. ）、石虎（Evodia rutaecarpa （Juss ）Benth Var.officinalis （Dode ）Huang ）或疏毛吴茱萸（Evodia rutaecarpa （Juss ） Benth.Var.bodinier （Dode ）Huang. ）的干燥近成熟果实。辛、苦、热，有小毒。归肝、脾、 胃、肾经。能散寒止痛，降逆止呕，助阳止泻[1]。吴茱萸始载于《神农本草经》，列为中品， 为温中止痛的必备药。近年来，国内外学者对吴茱萸的化学成分和药理作用等方面进行了深 入研究。研究发现吴茱萸主要含有生物碱、挥发油、苦味素等化学成分[2，3]，具有广泛的 药理作用[4]，其中生物碱是吴茱萸的主要有效成分[5]，而吴茱萸次碱是生物碱中最主要的 活性成分[6-8]。通过前期研究，我们已经证实了吴茱萸挥发油具有较强的急性毒性[9]，且 通过解剖发现其肝脏有病变，在此基础上，本试验考察了吴茱萸挥发油单次给药对小鼠肝毒 性的时毒、量毒关系，进一步探讨其肝肝损伤程度和特点。 1 材料 1.1 受试药物 吴茱萸药材购自安徽亳州市鲁康药材站（批号），经山东中医药大学生药学教 研室张芳鉴定为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa (Juss.)Benth. 的干燥近成熟果实，按2010 年版《中国药典》吴茱萸项下检查，符合各项规定。吴茱萸挥发油组分（批号）， 由本试验室提取制备，现用现配。 1.2 动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体重 18-22g，适龄、健康，共 340 只，购自山东大学实验动物 中心，动物合格证号：scxk(鲁。 1.3 仪器与试剂 德国贝尔 560 全自动生化分析仪，CL8000 型全自动生化分析仪，UV2100 紫外分光光 度计。丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒、天门冬氨酸氨基转移酶(AST) 测定试剂盒购自 南京建成股份有限公司。 2 方法 2.1 单次给药对小鼠肝毒性“时—毒”关系研究 取小鼠，雌雄各半，随机分为 11 组，每组 10 只，按处理时间点依次为 0(即正常组) ， 0.5，1，2 ，4 ，6，8，12，24 ，48 ，72 h 组。按 0.25 ml/10 g 灌胃 1 次，0 h 组小鼠均灌服蒸 馏水，其余时间点组灌服等生药量的吴茱萸挥发油（1.35ml/kg）。于相应时间点称量小鼠体 436 重，摘眼球取血，血 3 000 r·min-1 离心 10 min，取血清，采用所购买试剂盒，按照试剂盒说 明书，以生化分析仪测定血清ALT 、AST 。摘取小鼠肝脏、脾脏、胸腺称重并计算脏器指数。 另取一部分肝组织，常规 HE 染色，光学显微镜下观察其组织形态学变化。对肝