对“DNA的粗提取与鉴定实验”的分类比较.docVIP

“DNA的粗提取与鉴定实验”的分类比较 湖北省恩施清江外国语学校（445000） 彭邦凤 一、不同试剂用途及原理比较 试剂 浓度 用 途 原理（“△”为实验的主要原理） NaCl 溶液 2mol/L 溶解DNA DNA在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变，溶解度在2mol/L时最大、0.14mol/L时、最小 △ 0.14mol/L 析出DNA 0.015mol/L 鉴定时的溶媒 该浓度下也能溶解DNA 酒精 95%（体积分数） 除杂以提纯DNA DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液 △ 二苯胺 鉴定剂 DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色 △ 柠檬酸钠 0.1g/mL 抗凝剂 除去血液中的钙离子，防止血液凝固 二、方法步骤比较 项目 方法步骤 添加物质及目的 操作要求及目的 取用与要求 目的 要求 目的 制备鸡血细胞液（教师准备） 取0.1g/mL的柠檬酸钠100mL于500mL烧杯中，加鸡血180 mL 抗凝 缓慢搅拌 混匀血液与柠檬酸钠，防血凝 离心或置于冰箱 使血细胞与血浆分离 1．提取鸡血细胞的细胞核物质 20mL蒸馏水 促进血细胞吸水破裂，释放核物质 搅拌：单向、快速、5min 加速血细胞破裂 过滤：1-2层纱布 滤取含DNA的滤液 2．溶解细胞核内的DNA 2mol/L的 NaCl溶液40mL 溶解DNA 搅拌：单向、缓慢、1min 促进DNA溶解 3．析出含DNA的黏稠物 加蒸馏水至黏稠物不增加为止 降低NaCl溶液浓度，析出DNA 搅拌：单向、轻轻 混匀溶液，促进析出完整DNA分子 4．滤取含DNA的黏稠物 过滤：多层纱布 获取含DNA的黏稠物 5．将DNA的黏稠物再溶解 2mol/L的 NaCl 溶液20mL （再）溶解DNA 搅拌：单向、不停、3 min 使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中 6．过滤含有DNA的氯化钠溶液 过滤：2层纱布 滤取含DNA的滤液 7．提取含杂质较少的DNA 加入冷却的、体积分数为95%的酒精50mL 让部分杂质溶于酒精，析出含杂质较少的DNA 搅拌：单向 促杂质溶解、DNA析出 用玻璃棒卷起丝状物，用滤纸吸水 获得DNA（白色乳状丝状物） 8．DNA的鉴定 向2支20 mL试管各加0.015mol/L的NaCl溶液 一支对照，一支溶解DNA（作溶媒） 搅拌 促进DNA溶解 各加4mL二苯胺试剂 作为DNA鉴定剂 沸水浴5 min，冷却观察颜色 DNA所在试管溶液变蓝色 三、典例解析 1．下列关于“DNA的粗提取与鉴定”的实验原理中，说法错误的是 （ ） A．DNA在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变 B．利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNA C．DNA是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂 D．DNA溶液中加入二苯胺试剂经沸水浴后会出现蓝色反应 解析：该实验依据的原理是A、B、D，DNA不溶于酒精（属有机溶剂），C说法错误。 答案：C 2．下列关于实验操作的说法中，有误的是（ ） A．该实验中有两次加入蒸馏水，均是为了析出DNA B．该实验学生操作中多次用到搅拌，除最后一步未强调方向外，其余均要求单向搅拌 C．该实验中有3次过滤，过滤时使用纱布层数与需用滤液或黏稠物有关 D．实验三次加入NaCl溶液，无论浓度是2mol/L，还是0.015mol/L，均是为了溶解DNA 解析：对照比较表可知，除A说法有误外，其余各项均正确。两次加蒸馏水，第一次是为了使细胞吸水破裂释放出核物质（DNA），第二次是为了降低NaCl溶液的浓度从而析出DNA。 答案：A 3．填写本实验操作过程中所用试剂。 ⑴提取鸡血细胞中核物质： ； ⑵溶解核内DNA： ； ⑶析出溶液中的DNA： ； ⑷DNA粘稠物的再溶解： ； ⑸提取杂质较少的DNA白色乳状丝状物： ； ⑹鉴定DNA是否存在可用试剂： 。 解析： ⑹鉴定DNA是否存在常用：二苯胺试剂沸水浴为蓝色反应；也可选用甲基绿试剂，其颜色反应为蓝绿色。（其它略） 答案：⑴蒸馏水 ⑵2mol/L NaCl溶液 ⑶蒸馏水 ⑷2mol/L NaCl溶液 ⑸冷却的体积分数为95%的酒精 ⑹二苯胺试剂或甲基绿试剂 联系电话联系地址：湖北省恩施州清江外国语学校 邮政编码：445000 E-mail：bdezpbf@126.com