抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片探究.pdfVIP

·370· 的改变引起空间上的障碍，阻止喹诺酮进入喹诺酮作用区；另 变，所以推测Uu的DNA拓扑异构酶Ⅳ是氧氟沙星和环丙沙 外DNA的点突变可能干扰喹诺酮一酶一DNA相互作用。有 星的主要作用靶点，且同一基因上发生2个以上位点的突变 学者认为每一种gyrA突变都可造成对喹诺酮类中所有药物时，引起的耐药频率高于单位点突变；单独parE基因和酶蛋 交叉耐药；DNA拓扑异构酶Ⅳ的改变，产生对药物的低水平 耐药；当拓扑异构酶Ⅱ、Ⅳ均发生变化，则耐药程度更大。另 突变导致其编码417位的额氨酸被苏氨酸)，也可导致uu耐 有学者认为DNA旋转酶(gyrA)是革兰阴性菌的主要靶点，而 喹诺酮类药物，但交叉耐药的程度不及单独gyrA或阳rC的 DNA拓扑异构酶Ⅳ则是革兰阳性菌的主要靶点。我们的结 突变。 果显示只有在parC或parE有突变时才能检测到gyrA的突 抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片研究 朱中元王海波刘爱国 谢勇 发现结核病已经100多年了，对其研究、控制、治疗的成 SR 4．点样机：台湾率然精密股份有限公司制造的Ezspot 功曾使人们乐观地预言本世纪末即将消灭结核病。1970年—A101型Bic研xx生物晶片打点机。 后的近20年，在美国及工业化国家结核病平均以每年6％速 5．点样抗原的最适工作浓度及临界值的确立：最适工作 度下降，出现了使之成为罕见病的良好趋势。但是80年代末 浓度确定时先将抗原稀释成不同浓度，先与结核病人血清和 正常对照血清反应，再与不同浓度的金标记第二抗体反应，显 期艾滋病(AIDS)的流行使结核病猛然复活，如今世界上有1／ 色能取得最高的敏感性和特异性者为最适抗原和金标记二抗 3的人感染结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，结核 的最适工作浓度。临界值的确定采用最适工作浓度的抗原点 菌)，每年有800万新结核病患者出现，300万人死于结核病。 我国现有结核病人约450万例，每年病死近20万人。造成上样，与一定数量的正常对照血清标本反应后，芯片识别读数仪 述严峻形势的重要原因之一是结核病的早期快速诊断技术不 测定其灰度值，计算均数及标准差，均数与2倍标准差的和即 理想。目前已有的结核抗体检测试剂均为未纯化的结核菌菌 为临界值。各抗原与标本中的抗体、金标记二抗反应得到的 液抗原，存在特异性差的问题。我们使用基因工程表达的结 灰度值大于或者等于临界值者为阳性。否则为阴性。 6．蛋白芯片的制备：将上述结核菌抗原分别稀释成适当 核菌蛋白16和38kDa蛋白以及脂阿拉伯甘露糖(IAM)生产 了抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片系统(简称： 浓度，用点样机点样于硝酸纤维滤膜上，制成方阵，然后切成 结核芯片系统)，并进行了临床应用试验，取得较理想的快速 合适大小的小片，在滤膜的下方垫上一定的吸水材料，装上膜 诊断效果。报告如下。 板，使之成图示的芯片。该系统命名为结核菌多抗原的IgG 材料与方法 抗体芯片检测系统(简称：结核芯片系统)。 1．血清标本来源：结核病人血清由海南省农垦总局医院、 7．结核抗体DIGFA检测试剂：上海奥普生物医药有限公 武汉钢铁公司第二职工医院和海口市结核病防治所提供，共 司(简称：上海奥普)生产的结核TB—Dg严试剂。生产文 226份。其中活动性肺结核(痰涂片或者细菌培养结核菌阳 检测方法和结果判断按试剂说明书。 性)病人血清113份，慢性肺结核病人血清90份，结核性胸膜