蛋白激酶C激动剂促进可溶性淀粉样前体蛋白的分泌.pdfVIP

性。 与之相反，抗炎因子IL一10具有抑制巨噬细胞和小胶质细胞活化，降低细胞因子的合成，抑制细胞因 子受体的表达和抑制受体的活性的作用。AD患者脑内抗炎因子IL一10的下降是造成慢性炎症持续存在 引起这一变化的确切意义仍不清楚，有待今后深入研究。本实验支持炎性反应参与AD的发病机制，炎性 的条件下，可能成为AD病情监测的辅助生物学指标，具有潜在临床应用价值。本实验由于时间限制，样 本例数较少，故用于临床评价需慎重，有待扩大样本进行深入研究。 蛋白激酶C激动剂促进可溶性 淀粉样前体蛋白的分泌 上海交通大学医学院附属瑞金医院神经科200025上海陈生弟 杨红旗 巴茂文 任汝静 张宇红 马建芳 陆国强 阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)是一种严重影响老年人脑高级功能的神经系统变性疾病， 临床以进行性的记忆和认知功能障碍为特征。该病病因未明，目前尚无特异的治疗措施。已经证实，脑内 淀粉样前体蛋白(amyloidprecursor 谢的药物有可能对AD具有治疗作用。 kinase 研究表明，蛋白激酶C(protein form 的物质如佛波醇酯(phorbol of soluble amyloidprecursor protein，sAPPa)分泌增多，p淀粉样蛋白(pamyloid，Aft)释放减少。本研究的 作用。 材料与方法 一、主要试剂 TPPB、GF razolium bromide，MTT)、二甲基亚砜(dimethyl Pierce公司提供；ECL化学发光试剂盒由Amersham公司提供；Western 提供。 二、细胞培养和药物处理 PCI2细胞(中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所提供)培养于含10％胎牛血清和1％的青一 链霉素混合物的DMEM细胞培养液内，细胞在C02体积分数为5％，100％饱和湿度的377C恒温细胞 培养箱内培养。当细胞至80％左右融合时弃去培养液，胰酶消化后传代。 当细胞进入对数生长期后，弃去培养液，用PBS洗2遍，重新加入不含血清的DMEM培养液作用12 h，然后加入DMSO(对照)或不同浓度的TPPB(溶于DMSO)，作用3h后分别收集上清液，蛋白浓缩后冻 C12000 存。细胞用RIPA细胞裂解液裂解后在47 rpm离心30min，上清液转移、分装后冻存备用。 PKC抑制剂GF109203一X(溶于DMSO)在TPPB加入前30min加入，其终浓度为10肛M。 三、细胞活力检测 h后加入终浓度为0．01、0．1、l、10、 细胞以104／孔的密度接种于96孔板(Corning公司，美国)中，24 h后 20、50和100／_M／L的TPPB，每一浓度设6个复孔。同时设不含细胞的培养液组作为空白对照。24 C孵育4h。然后弃去培养液，每 更换培养液，每孔加入180L的培养液和20肛L的5g／L的MTT，377 Sunrise 孔加入200扯L的DMSO，377C孵育30min。在多功能酶标仪(TecanEliza—Reader，瑞典)测 570 nM的吸光度，与正常细胞组吸光度的比值作为相对细胞活力。 四、sAPPa和APP的WesternBlot检测 sul— 测定蛋白浓