三刺皂荚黄化病植原体的分子鉴定.pdfVIP

中国森林病虫 2013年 11月 第32卷 第6期 ·1· 三刺皂荚黄化病植原体的分子鉴定 都业娟，李成亮，石宝萍，向本春 石河子大学新疆绿洲农业病虫害治理与植保资源利用 自治区高校重点实验室，新疆 石河子 832003 摘要：采用巢式PCR，分别用植原体 16SrRNA，16S一23SrRNA间区序列及 tuf基因的通用引物对表 现黄化症状的三刺皂荚DNA进行扩增，得到大小为1．2，0．3，0．8kb特异性片段 。对该片段分别 克隆、测序及序列分析表 明，三刺皂荚黄化病植原体 HoY 上述 3序列与榆树黄化组B亚组 16SrV—B 的枣疯病植原体 JWB 相应序列的同源性最高，分别为 99．8％，100％ 和 100％。 iPhyClassifier在线分析显示，HoY与JwB AB052876 有相 同的16SrDNA酶切 图谱，表明三刺皂 荚黄化病植原体属于榆树黄化组 B亚组 16SrV—B 。 关键词 ：三刺皂荚；植原体 ；16SrRNA；16S一23SrRNA 间区；tuf基 因；分子鉴定 中图分类号：$763．14 文献标志码 ：A 文章编号：1671—0886 2013 06—0001—05 M olecularidentificationofthephytoplasmaassociatedwithyellow diseaseofGleditsiatriacanthos／ DUYejuan，eta1． KeyLaboratoryatUniversitiesofXi~iangUygurAutonomousRegionforOasis AgdculturalPestManagementand PlantProtection Resource Utilization，ShiheziUniversity，Shihezi 832003，China Abstract：UsingnestedPCR withuniversalprimersforphytoplasmal16SrRNA，16S-23SrRNA space regionandtufgenes，DNA fragmentsabout1．2 kb，0．3kb and0．8kbinlenght wereamplified from htetotalDNA ofhoneylocustshowingyellowssymptom．Ampliconswerecloned，sequencedandphylo— geneticallyanalyzed．Theresultsshowedhtathte16SrRNA ，16S一23SrRNA spaceregionandtufgene ofphytoplasmaisolatedfromhoneylocustyellowphytoplasma HoY shared99．8％，100％ and100％ identitieswithhtatofjujubewitches-broom phytoplasma JWB belongingtosubgroupBof e‘lm yellowgroup’ 16SrV—B ．TheresultofonlineanalysisofiPhyClassifierfor16SrDNA showedthe 16SrRNAgeneofHoYhadidenticalpatternswihtJWB AB052876 ．Allhteseresultsindicatedthat thephytoplsama associated wiht honeylocustyellowsdiseasebelonged to the subgroup B of ‘elm yellowsgroup’ 16SrV-B ． Key words：honeylocust；phytoplasma；16S rRNA ；16S一23S rRNA spaceregion；tufgene；moleculra i— dentifiCatjon 植原体 Phytoplasma 原称类菌原体 MLO ， rp 、延伸因子 tuf 基因、16—23SrRNA间区序列 属柔膜菌纲，是重要的病原微生物。主要 由取食植 16S-23SrRNAspaceregion 、转运蛋 白 SecY 基 物韧皮部的叶蝉、飞虱等昆虫传播，可危害粮食、蔬 因等，在检测和鉴定中的应用越来越多 。 菜、花卉、林木、杂草等各类植物，感病植株表现出黄 三刺皂荚GleditsiatriacanthosLam．，豆科皂荚 化、顶枯、丛枝、簇生、花变 叶、矮化、小 叶等症 属，又名三刺皂角、美国皂角，原产北美地区，后引进 状 ¨ 。目前世界上已报道的植原体病害有 1000