HPLC法测定人血浆中克林霉素含量及其药动学研究.pdfVIP

西南 国防医药2015年 3月第25卷第 3期 ·299· HPLC法测定人血浆中克林霉素含量及其药动学研究 唐 冰 ，周娅琳 ，韩 敬 [摘要] 目的 建立人血浆中克林霉素的HPLC检测方法。方法 采用HPLC法检测人血浆中克林霉素含量，检测条件 为：色谱柱：Inertsil@ DOS-3c 5 m硅胶柱 250mm×4．6mm ；流动相：乙腈／0．o5MKH2PO4 30／70 v／v ，流速： 1ml／min；柱温：35℃，检测波长：204nm，进样量为 100 。结果 血浆中克林霉素浓度在0．20—16．0~g／ml范围内线性关 系良好 r 0．9992 0．9998 ，最低检测浓度为0．20 IrIl，方法学回收率为82．42％一89．37％，日内及 日间精密度RSD 15％。结论 此方法专属、准确、灵敏度高，样品处理过程简便 ，适合克林霉素临床药代动力学研究。 【关键词] 克林霉素 ；检测；HPLC；血浆；药代动力学 中图分类号 R927．11 文献标识码 A 文章编号 1004-0188 2015 03-0299-03 doi：10．3969／j．issn．1004-0188．2015．03．026 目前检测人血浆中克林霉素含量的常用方法 2．2．1 盐酸克林霉素储备液 精密称取盐酸克林 有HPLCS法和 LC／MS／M法。所报道 的HPLC法， 霉素对照品 10．0mg于 10ml量瓶 中，用水溶解并 需要经过固相萃取这一步骤u剖，检测操作较为繁 定容配成浓度为 1．0mg／n~的储备液，置4℃冰箱 琐，保留时间较长；而 LC／MS／MS法检测结果准 贮存备用。 确 引、重现性好、精密度高，但其 由于检测仪器的 2．2．2 内标奈韦拉平储备液 精密称取奈韦拉平 价格较高，难 以推广应用。本研究探讨了直接采用 对照品 1Omg于 10m1量瓶中，用水溶解并定容配 HPLC．Uv法检测人血浆中的克林霉素，以适合克林 成浓度为 1．0rag／m1的储备液，置 4cI 冰箱贮存 霉素临床样本检测的需求。 备用。 2．3 血浆样本的处理 于0．5ml血浆中分别加入 1 仪器与材料 50 l内标溶液 10 g／nll奈韦拉平储备液 ，100 l 1．1 仪器 Waters2690型高效液相色谱仪：包括 氢氧化钠溶液 O．4mol／L ，涡流混合0．5rain，定量 2695溶剂输送系统、在线脱气机、自动进样器、2487 加入二氯 甲烷 3．5ml，涡流混合 lrain，离心 双通道紫外检测器、柱温箱、Empower数据系统 5000r／rain 5min后，弃上层，留下层40oI 水浴氮 Waters公司 ；BP121S电子天平 德国赛多利斯 ； 气吹干；用流动相200 溶解残渣，涡流混合 1min LDZ-5-2型 自动平衡 离心机 北京离心机厂 ； 离心 10000r／min 5min，取上清液 150 置于进 AS2060B型超声波清洗仪 美国AUTOSCIENCE ； 样小瓶 内，进样 50 进行分析，记录色谱图。 XW．80A型漩涡混合器 Vortex 上海精科 ；Texas 2．4 特异性 采用2．3处理步骤分别处理空 白血 75062高速离心机 美国雅培 。 浆、空白血浆 +克林霉素对照品、给药后 1h的受试 1．2 试剂 盐酸克林霉素胶囊 上海新亚药业 ；盐 者的血浆样品、以及配制的最低检测浓度血浆样 酸克林霉素对照品 含量 99．5％，上海新亚药业 ； 品，以2．1色谱条件分别进样检测，其色谱图见图 奈韦拉平对照品 内标，纯度99．5％，苏州百拓 ；空 1。盐酸克林霉素和内标 的保 留时间分别约为 白血浆 本院输血科提供 ；乙腈 色谱纯，美国默 6．1rain和8．5rain。结果表明，空白血浆中的内源 克 ；二氯甲烷 色谱纯，美国TEDIA，批号：504071 ； 性物质不干扰盐酸克林霉素和内标奈韦拉平的 甲醇 色谱纯，美国默克 ；超纯水 MilliQ· 。 测定。 A 2 方法和结果 2．1 色谱条件 色谱柱：InertsilDOS-3C 5 柱 250mm ×4．6mm ；流 动 相 ：乙腈／0．05M KH2PO4，流速：1ml／min；柱温：35℃，检测波长： 204nm，进样量为 100 l。 2．2 贮备液及工作液配制 作者单位：650032昆明，成都军区昆明总医院药剂科 唐 冰， 周娅琳 ，肾病内科 韩 敬 · 300· 西南国防医药2015年 3月第25卷第 3期 同量的盐酸克林霉素标准溶液，使其浓度分别为 0．2、0．5、1、2、4、8、16 g／ml。按样品处理与测定方 法进行测定，以