胎儿弯杆菌表面蛋白（SapA）基因的分段表达及其免疫原性分析.pdfVIP

第 3O卷 第 11期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．30．NO．11 2008年 11月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine NOv． 2008 胎儿弯杆菌表面蛋白(Sa )基因的 分段表达及其免疫原性分析 赵海玲 一，刘思国 ，刘慧芳 ，王春来 ，司 微 ，杜艳芬 ，杨金国1,3，林靖凯 ， (1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 ／动物细菌病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001；2．内蒙古农业 大学 动物科学与医学学院，内蒙古 呼和浩特 010018；3．吉林农业大学，吉林长春 130118；4．广西大学，广西南宁530004) 摘 要：应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和 sapA—C (1422bp)，采用DNA重组技术，将 2个基因片段分别连接于表达载体 pET32a(+)，并在大肠杆菌中诱导表达 (rSapA—N和 rSapA—C)，用金属鳌合层析的方法纯化蛋 白。以Westernblot检测重组蛋白的免疫学活性 ，ELISA试 验分析2种蛋白用于胎儿弯杆菌病血清学诊断的可能性。结果表明，以可溶形式表达的2部分蛋白分子量大小约 66l(u，与预期大小相符 。纯化的蛋 白均具有 良好 的免疫学活性 ，但蛋白rSapA．N 比蛋 白rSapA．C的免疫学活性 高，rSapA．N具有良好的胎儿弯杆菌病血清学诊断的应用价值 。 关键词：胎儿弯杆菌；表面蛋白基因(SapA)；原核表达；纯化；ELISA 中图分类号：$852．618 文献标识码：A 文章编号：1008—0589(2008111．0842．04 Expressionofsurfacelayerproteins(SapA) genefrOm Campylobacterfetus ZHAOHai-ling，。，LIU Si—guo ，LIU Hui．fang，W ANG Chun—lai ， SIW ei，DU Yan·fen，YANG Jin—guo ，LIN Jing-kai， (】．NationalKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyof AgriculturalSciences，Harbin 150001，China；2．CollegeofAnimalScienceandMedicine，InnerMongoliaagnculutreuniversity， Huhhot010018，China；3．JilinArgiculturalUniversity，Changchun 130118，China；4．GuangxiUniversity，Narming530004 China) ， Abstract：ThesurfacelayerproteinsSapA-N(1398bp)andSapA—C(1422bp)ofCampylobacterfetuswerePCRamplified from Campylobacterfetus553strain，clonedandexpressedinaE．coliexpresssystem ．Theexpressedproteinswereide