台湾杉DNA提取及RAPD反应体系的建立.pdfVIP

第47卷第 10期 湖北 农业 科学 Vo1．47No．10 2008年 10月 HubeiAgricultural Sciences 0ct．．2008 台湾杉DNA提取及RAPD反应体系的建立 陈光富。杨琴军。陈龙清 (华中农业大学园艺林学学院，武汉 430070) 摘要 ：台湾杉富含多糖和多酚等物质 ，这对获取高质量的DNA造成 了困难，采用常规 CTAB法和改 良的 CTAB法分别对 台湾杉 DNA 的提取进行 了研究。结果表明，常规 CTAB法提取的DNA含杂质多、难溶 解、易降解；改 良的 CTAB法提取 的DNA质量高，A2椰／A280比值在 1．8左右 ，每 1．0mg干样可获取 DNA 200～600ng左右 ：电泳检测表 明，所获得 的DNA完整、无降解 。通过对台湾杉 RAPD—PCR反应体系中的 各个影响因素进行优化 ，建立了台湾杉 RAPD扩增分析的稳定反应体系。即20 L反应体 系中含 1U TaqDNA聚合酶 ，0．2mmol·L～dNTPs，1．8mmol·L一。Mg ，0．4p~mol·L-引物 ，40ng模板 DNA。应 用优化 后 的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱 ，带型清晰，重复性好 ，为进一步开展 台湾杉的保育遗传 学研 究奠定 了基础 关键词 ：台湾杉：DNA提取 ；RAPD；反应体 系 中图分类号：$791．28；Q523~．8；Q503 文献标识码 ：A 文章编号：0439—8114(2008)10—1108—03 DNA Isolation and EstablishmentofRAPD Reaction System ofthe Endemic and EndageredGymnosperm Taiwania cryptomerioides CHENG Guang-fu，YangQin-jun，CHEN Long-qing (CollegeofHorticultureandForestrySciences，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China) Abstract：High quality oftotalDNA isolation wasdiffcuh toobtainfrom Taiwania cryptomerioideswhich contained abundant polysaccharides，mylase and othersecondary compounds．Here an improved method waspresented to extractDNA efficiently． Theisolated DNA had been provedintegrated，hardly dergaded．DNA concentration and extraction rate were high，200~600 ng·mg— dry weight．Thismodifiedprocedurewassimple，inexpensive and reliable．Based on thehigh quality genomicDNA， some reaction conditions ofRAPD—PCR were optimized．The results showed thatthe RAPD—PCR system with DNA polymerase 1U，dNTPs 0．2mmol·L～，1．8mmol·L一 Mg ，random primer 0．4 mol·L一 and genomic DNA 40 ng in 20 L solution wassuitableforTaiwaniacryptomerioidesamplification reaction． Key words