松花粉硫酸酯化多糖调控小鼠T细胞[Ca2＋]i的研究.pdfVIP

中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2014Aug；30(8)：1151—5 ·1151· 网络 出版时间：2014—7—1016：51 网络 出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／doi／10．3969／j．issn．1001—1978．2014．08．023．html 松花粉硫酸酯化多糖调控小鼠T细胞 [Ca2+]的研究 李娜娜，刘 铭，耿 越 (山东师范大学生命科学学院动物抗性生物学省重点实验室，山东济南 250014) doi：10．3969／j．issn，1001—1978．2014．08．023 体中多种生理活动不可或缺的离子，细胞质 内钙离 文献标志码：A 文章编号：1001—1978(2014)08—1151～05 子浓度升高是 T细胞被活化引起 的最早变化之 中国 图 书分 类 号：R．332；R284．1；R329．24；R348．1； 一 _4J。 T淋 巴细胞 内ca 浓度 的上升主要通过 R392．12：R977．6 CRAC通道来实现 ]，此外还可能通过P2X嘌呤受 摘要 ：目的 探讨马尾松花粉硫酸酯化多糖组分 (SPPM60一 体_6J、电压门控的钙离子通道 来介导ca 内流作 D)对小鼠脾脏T淋巴细胞内 [Ca ]的调控机制。方法 用。但 目前对硫酸酯化多糖与 Ca 的关系研究较 水煮醇沉法提取马尾松花粉粗多糖 ，60％乙醇分级，Sephacr- 少，对其作用机制尚不了解，其如何作用于 T细胞 ylS-400HR纯化得 PPM60一D，氯磺酸一吡啶法进行硫酸酯化 表面，进而影响胞 内钙离子浓度仍需进一步研究。 得SPPM60一D。尼龙毛柱法分离纯化小鼠脾脏T淋巴细胞 ， 用SPPM60-D处理，测定T淋巴细胞内[ca“]i，ELISA试剂 本实验分别选用几种钙离子信号通路的抑制剂来研 盒检测细胞上清中 IL一2和 IL_4水平。结果 ConA与 sP— 究松花粉酯化多糖组分SPPM60一D对小鼠脾脏T淋 PM60-D均能升高T细胞内[ca ]，与对照组相 比，升高率 巴细胞[ca ]；调控的可能信号通路，为马尾松花 分别为211．5％、201．8％ (P0．O1)。2一APB、LY294002、 粉多糖的实际应用提供科学依据。 U73122、维拉帕米均可 以抑制 [ca2]的升高，而 TAK-242 1 材料与仪器 对其没有明显作用 ；SPPM60一D使细胞上清中IL-2和IL4水 1．1 材料与试剂 破壁马尾松 (Pinusmassoniana) 平上升了6．94倍和5．95倍 (P0．01)，2-APB可以明显抑 花粉 (破壁率高于95％)由烟台新时代健康产业集 制上述细胞因子水平 ，而TAK242没有明显作用。结论 推 团提供。水煮醇沉法提取马尾松花粉粗多糖。三氯 测SPPM60-D的作用机制是经 TCR／CD3受体，通过 TCR／ 乙酸法除蛋 白，不同浓度的乙醇分级沉淀，得60％ CD3一PI3K-PLC—IPR-Ca 信号通路 ，促进小 鼠T淋 巴细胞 乙醇组分PPM60，SephacrylS-400HR分离纯化得组 [ca“]，的升高，从而提高T淋巴细胞 IL一2和 IL4的水平。 分 D，经氯磺酸．吡啶法硫酸酯化得SPPM60一D，红外 光谱证实酯化成功。硫酸钡比浊法测定SPPM60一D 关键词：马尾松花粉 ；硫酸酯化多糖；T淋巴细胞 ；[ca ]；； 中硫含量，代人公式后算出取代度为 1．202。尼龙 ca 信号通路；细胞因子