苗药组方熏洗对家兔早期膝骨关节炎模型软骨细胞凋亡相关因子AI及其NO的实验的研究.pdfVIP

苗药组方熏洗对家兔早期膝骨关节炎模型软骨细胞凋亡相关因子AI 及NO的实验研究 王政1张力文2崔瑾2陈波2杨孝芳2 陈盼碧2 通讯作者：王兴桂2 (1贵州省凯里市中医医院贵州凯里5560002贵阳中医学院贵州贵阳 550002) 【摘要】目的：探讨苗药熏洗疗法对实验性家兔早期膝骨关节炎软骨细胞凋亡与 增殖的作用及机制。方法：采用兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶制造KOA模型，经 苗药熏洗治疗20天后，肉眼、光镜下观察软骨组织的病理改变，并用Mankin， 法进行评分；亚硝酸盐还原酶法检测关节液的NO水平；流式细胞仪检测软骨细 胞的凋亡指数(AI)。结果：肉眼观察模型组可见到关节软骨表面的改变：在光镜 观察下苗药熏洗能显著抑制软骨的炎症，减轻软骨病理改变；降低软骨细胞的凋 亡指数(AI)，而对增殖无明显影响；降低关节液的NO水平。结论：苗药熏洗疗 法可以抑制膝骨关节炎软骨细胞的凋亡，改善软骨的病变；其作用途径可能和抑 制软骨炎症、减少NO释放、降低软骨细胞的凋亡指数有关。现代药理研究已经 证实，该实验用苗药验方有较好的镇痛、抗炎及抗菌作用，这可能是苗药熏洗改 善软骨炎症的作用机制之一。且各种药物联用能改善微循环，这些作用可能通过 抑制炎症因子释放、消除自由基损伤、改善骨内微循环、促进软骨基质合成来抑 制软骨细胞凋亡，改善软骨病变。 关键词：苗药熏洗疗法；膝骨关节炎：软骨细胞凋亡与增殖；家兔； 项目资助：国家自然科学基金；项目批准号 骨关节炎(osteoarthritis，OA)是一种慢性、退变性的关节疾病，在老年人群中最常见。 国际OA专题会议在1995年提出了关于OA的最新定义，认为在力学和生物学因素共同的作用 下，软骨细胞、细胞外基质以及软骨下骨三者的降解和合成这一正常的偶联会发生失衡，最 终导致OA的形成【1】。而关节疼痛、僵直、畸形和关节障碍，关节活动时出现摩擦感、响声， 严重者疼痛剧烈、持续不断、关节功能严重障碍，最终导致肢体的残废，以上这些都是OA 的主要临床表现。随着社会人口的老龄化，该病不仅成为了医学问题，也成为了社会问题， 日益引起了人们的重视。据美国统计，在50岁以上的人群中，导致其丧失劳动能力第二位原 因的就是骨关节炎[2】。 目前治疗OA的重点就是防治关节软骨的退变，这是因为关节内软骨发生退变并伴有骨赘 形成和软骨下骨骨质的硬化是骨关节炎的病理改变。 软骨细胞和软骨基质构成正常的关节软骨，而在这一结构中，能使软骨具有一定的外形 和弹性的是软骨基质，该结构能起到抵抗外力的作用；负责清除坏死退变的基质，而且还能 不断合成新的基质的就是软骨细胞，该结构能够保持关节软骨合成和降解的平衡，最终维持 其正常的功能。机体在一定的生理和病理情况下，细胞会发生自动消亡，这一消亡的过程主 要是通过基因的调控来实现的，而这一过程就叫作细胞凋亡，多种因素能引起关节软骨细胞 的凋亡。关节软骨细胞的凋亡和增殖在正常情况下是处于动态平衡的，但凋亡和增殖的平衡 在一些病理状态下能被破坏，从而引起关节软骨萎缩变薄，最终导致骨关节炎的发生。所以 抑制软骨细胞的凋亡成为防治骨关节炎的重要途径。 1实验材料与方法 1．1实验材料： 主要试剂与仪器：DAB显色试剂盒、苏木、30％H202、0．1M枸橼酸钠缓冲液、4％多聚甲醛、 84 兔多克隆Bax．抗、兔多克隆Bcl．2一抗、Bax免疫组化试剂、Bcl．2免疫组化试剂等。激光共 聚焦显微镜、旋三洋MDF．U4086S超低温冰箱一85℃、不锈钢蒸馏水器、恒温水浴锅、电 热恒温水浴箱、电子分析天平、恒温水浴振荡器、电子天平、切片机等。 1．1．1实验动物 3月龄健康日本大耳兔66只，体重O．5：￡--0．2kg，雌雄各半(重庆腾鑫生物技术有限公司)。 动物合格证号：0004161，饲以标准育成饲料(重庆腾鑫生物技术有限公司提供)，自由饮用 干净的自来水。饲养室温度24．25‘C，相对温度7％左右。全部动物均经适应性喂养1周以 上无异常后开始正式实验。 1．1．2实验药物 木瓜蛋白酶：P．3250，由北京夏斯公司提供，mininlum 苗