胚胎干细胞来源的树突状细胞制备骨髓瘤融合瘤苗研究.pdfVIP

神经系统疾病的动物实验提供了依据。 A132．胚胎干细胞诱导发育为树突状细胞及其生物学特性的研究 何志旭黄琛吴倩倩肖林生 贵阳医学院干细胞研究中。贵州省贵阳市北京路4号 (贵阳550001) Gorfl．cn E—mail：Hezx306@yahoo 且的 stem 探讨胚胎千细胞(embryoniccell，ESC)诱导分化为树突状细胞(dendriticcells，DC) 的实验方法，实现体外大规模扩增高纯度13(3用于临床免疫治疗。方法取E14小鼠胚胎干细胞 系，脱饲养层培养3代，分散细胞为单细胞悬液后接种于细菌培养皿悬浮培养，诱导发育为胚胎体 (EB)，然后吸出EB接种于6孔板，每孔4—5个EB，培养液中加人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子 式细胞仪检测CD80、CD86、MHCII—DR表达。并于培养15天后培养液中另加入磷酸酯多糖 (LPS)以促进DC的成熟，24小时后收获细胞，观察细胞形态及摄片并做扫描电镜检查，分析细胞表 型并与不成熟DC细胞表型做对比，异体淋巴细胞增殖实验行功能检测。结果 ES细胞脱饲养层 培养3代后进行悬浮培养，3天后见圆形、椭圆形EB形成，5天后EB逐渐增大，第7天部分EB开始 膨胀为囊状拟胚体，拟胚体内出现腔隙．且随着天数增加，腔隙逐渐增大。EB培养14天，转入6孔 板，加入GM—CSF与IL一3后第二天可见EB贴壁，周边有细胞游出，4—5天可见胚体周围细胞呈 集落式生长．大部分细胞呈圆形，轻微贴壁，没有明显的树突状突起。随时间推移细胞逐渐增多，14 细胞从集落中释放出来呈悬浮生长，并逐渐增多。细胞胞体见毛刺，为成熟DC(m—DC)。扫描电镜 CDS0、CD86、 观察见细胞有长短不～的突起，表面粗糙和层叠状的皱襞，呈典型13(3表现，im—DC a]80、 功能检测发现。ES细胞来源的DC具有强烈的激发同种异体淋巴细胞增殖的作用，刺激细胞数与反 13(3的免疫刺激活性越强，证实ES细胞来源的DC具备正常的免疫学功能。结论使用GM— —II抗原，对同种异体淋巴细胞有强烈的增殖反应。故Es细胞可作为DO来源的一条新途径，对于 体外大规模制备DC用于免疫过继治疗提供了一个较好的方法。 · A133．胚胎干细胞来源的树突状细胞制备骨髓瘤融合瘤苗的研究 何志旭1，2剜俊峰1沈冬1黄绍良3项鹏4彭延文4 1贵阳医学院附属医院儿科 2贵阳医学院组织工程与干细胞中心 (贵阳550004) 3中山大学第二附属医院儿科4中山大学于细胞与组织工程研究中心 E—rmihlianeliu@126，C01TI stem 目的 在体外培养的条件下诱导小鼠胚胎干细胞(Embryoniccell，ESC)分化形成具有正 常表型及功能的树突状细胞(Dendriticcell，DC)．并利用小鼠ESC来源的DC作为载体研制抗骨髓瘤 融合瘪苗，同时对其体外抗肿瘤活性以及体内应用的安全性加以检测。方法 将常规培养于预先 10em的细菌培养皿中，在不含LIF的情况下悬浮培养诱导其生成拟胚体(Embryonicbody，]fiB)，14 后收集悬浮细胞即为成熟的DC。对ESC—DC进行表型鉴定及形态学观察，并通过混合淋巴细胞反 应检测其刺激同种异基因淋巴细胞增殖的能力。同时利用聚乙二醇(PEG)作为融合剂，将不成熟 台，随后用含有次黄嘌呤一氨基蝶呤一胸腺嘧啶核苷(HAT)的选择性培养基对融合细胞进行筛选以 ml TNF—a以诱导其分化成熟。对融合细胞的生长特性进行观察、并检测其体外特异性抗肿瘤活性 以及体内成瘤情况。结果 培养皿中悬浮培养，2—3天后便可见大量EB生成，随着培养时间的延长，EB的体积逐渐增大，可