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饲用植酸酶活性测定方法比较试验 屈利文杨先奎 国家饲料质量监督检验中心(武汉) 摘 要GB／T18634-2002是一种体外快速测定饲用植酸酶活性的方法，国内某些企业提出 内部企业标准方法，在饲料业中引起一些争论。全国饲料工业标准化技术委员会提出对 GB／T18634—2002修订意见。本试验采用了上述三种方法对市场上三个植酸酶产品洚f生进行了测定。 结果表明：不同产品用不同检测方法结果差异较大。 关键词植酸酶活性 测定 植酸酶在饲料中可降解饲料原料中的植酸盐，提高饲料中磷的利用率，减少磷的添加量，降低 磷的排放和污染。同时，节约饲料配方空间，便于配方设计，节约成本，具有明显的经济效益和积 极的环保意义。是一种典型的绿色产品。 为快速判定饲料植酸酶质量等级，确定植酸酶的最佳用量，体外法测定饲用植酸酶的活性，是 会(AOAC)方法等国外有关文献资料基础上，确定了饲用植酸酶的活性单位定义。采用绝对法和相 对法测定植酸酶产品和配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中植酸酶的活性。 此项标准制定时，国内市场上以进口植酸酶为主，而且价格很贵，全国饲料中实际使用量不大。 现在，随着鳞矿资源减少及植酸酶价格降低，全国饲用植酸酶的产量大幅增加，植酸酶生产企业发 展迅速，品种多样。但由于生产植酸酶的菌种及工艺不同，国内植酸酶产品按照GB／T18634—2002来 检测时相对偏差达20％～30％，结果偏低30％～50％。据称这是由于国内生产的植酸酶蛋白在试管壁上 有强吸附造成的。而添加TritonX一100及牛血清白蛋白可有效减少分析相对偏差。为此，国内某些 企业提出内部企业标准方法(见表1中方法3)，该方法用TritonX一100及牛血清白蛋白代替吐温一20， 同时，将酶活测定的缓冲液pH值由5．50改为5．oo，该法使得国内植酸酶产品检测结果大幅提高。然 而，由于该法与国家标准差别较大，在饲料检测业中引起一些争论。 牛血清白蛋白代替吐温-20，未将酶活测定的缓冲液pH值由5．50改为5．00。3种方法主要内容和比较 ’’ 见表l。 ． 表1 饲用檀酸酶活性测定方法比较 方法1 方法2 方法3 酶活 植酸钠浓度5．0tool／l，37℃，植酸钠浓度5．0tool／1，37。C，pH5．50，1|l植酸钠浓度5．0tool／1，37C， 定义 umol无机磷／minmol瑚磁／min pH5．00，1pmol无机磷／min pH5．50，l 样品 l、O．25m01／1乙酸盐缓冲液1、0．25mol／l乙酸盐缓冲液，调节pH5．50。1、0．10mol／1乙酸盐缓冲液 前处 +0．01％吐温一20，调节pH5．50。2、0．25mol／1乙酸盐缓冲液 +O．05％TritonX一100+0．05％ 理缓 +O．05％TritonX一100+0．05％牛血清白蛋 牛血清白蛋白，调节pH5．00。 冲液 白，调节pH5．50。 1、钼酸铵100g／l 1、钼酸铵100g／1 1、钼酸铵15g／1 显色 2、钒酸铵2．35g／1 2、钒酸铵2．35g／1 2、硫酸亚铁27 g／1 终止 3、硝酸：1+2 3、硝酸：1+2 3、显色液：4份(1)+l份(2) 液