人组织样品中SNCG基因CpG岛甲基化拷贝数定量分析.pdfVIP

·20· 史堡亟堕匿堂苤查!螋!生垒旦箜堡!鲞缝型g堕垫』里型丛塑：』!塑兰哑：!堂璺!：坠耻k里型 ．论著． 人组织样品中SNCG基因CpG岛甲基化 拷贝数定量分析 周静文贤子邓大君 【摘要】 目的建立准确测定肿瘤组织中SNCG基因CpG岛甲基化拷贝的含量的方法。方法 利用亚硫酸氢钠修饰．克隆测序法确定胃组织该CpG岛中关键性CpG位点，然后利用限制性内切酶 建立了测定该位点甲基化状态的分析法(COBRA)，再利用变性高效液相色谱技术进行定量。结果 对2个肿瘤细胞系、2个正常人胃黏膜样品、2对原发性胃癌及其癌旁非癌组织进行分析发现，在该 CpG岛的16个CpG位点中，一88位等5个CpG位点的甲基化状态与整个CpG岛的甲基化状态一 致；利用限制性内切酶Acil能够区分该位点甲基化状态：在该位点未甲基化时(GTGG)不能酶切，而 甲基化时(GCGG)酶切敏感；在变性高效液相色谱仪上甲基化片段和非甲基化片段能够完全分离；根 据色谱峰面积可知两者的比例，在1．25％一100％范围内有良好的线性关系，重现性较好；对克隆测 序样品进行限制性内切酶．变性高效液相色谱测定，结果与克隆测序一致。结论建立的限制性内切 酶．变性高效液相色谱法能够定量测定SNCG基因CpG岛甲基化。 【关键词】 CpG岛；甲基化；色谱法，高效液相 of ofSNCG islandsinhumantissue thecombined Quantificationmetllylation CpG samplesby COBRA-D]田现C School Da-jun．PekingUniversityof assay z阳∥ring，删X如n-g，DENG and InstituteCancer OncologyBelting for Research，100036＆彬昭，China author：DENG cn Corresponding Da-fl。tn，Email：dengdajun@bjm札edtL To a fordetectionof ofSNCG 【Abstract】0bjectivequantitativeassay methylation CpG setup tIle siteswithinthe islandinhumantissue statusof 16tested samples．MethodsMethylation CpG CpG islandwas for2 carcinomacell normal mucosa analyzedbybisulfite．clone．sequencinggastric lines，2 gastric 2 of carcinomasandtheir samples，andpairsprimarygastric correspondingnon—neoplastictissues， withthe The of一88andotherfour sitesWaswellcorrelated respectively．Resultsmethylation CpG oftheoverall combinedbiSRlfite．restrietion methy·lation Cp