真核细胞质膜蛋白质组的研究进展.pdfVIP

科技创新 开拓未来卅∞5笨濒蹇隳燕大学第一滔毒每摹；}技论坛 真核细胞质膜蛋白质组研究进展④ 张丽军 谢锦云 李选文 梁宋平 (湖南师范大学生命科学学院) 摘要细胞膜(质膜)蛋白质是细胞的“门铃”商“九户”，是许多筠物的作用靶标。细胞质膜萤白质级 的谚究正成为蛋白震纽研究的热点，这方面的磅究透艘有利于蘩要功能的低丰疫簧白壤的发掘，为楚耪研发、 疾病的诊断提供靶体与标记蛋白质。然而质膜蛋白质组的研究在强疏承性跨膜蛋白质和低丰度膜蛋白质的 分离和鉴定上遇到了方法学的挑战。本文对质膜及其微区的纯化、质膜蛋白质纽的分离、茶定、生物信息学以 麓亚细胞定位研究的i确进展作了扼要奔绍。 关键词质膜；蛋白质组学；2一维凝胶电泳(2DE)；质谱 随着许多生物体蕊因组测序的完成，蛋白质组的研究成为继基因组研究之后的另一个热 门。然褥生物体的蛋岛质多这上吾秀种，显蛋囱质酶丰度毒l—106的差异。要全霞了解一种 真核细胞的蛋白质组，必须对其进行分级分离，而最好的分级分离方法是亚细胞器的分离，然 后对各细胞器盼蛋白质组进行单独研究。 在各细胞器中，细胞质膜趣着举足轻重的作用。因为细胞质膜(PM)是细胞与环境直接接 触豹界遁，也是细胞内外物质、能量与信息交换的场所。细胞膜蛋自质组是缨胞的“门铃”与 “门户”，执行细胞内外物质交换、信息转换、细胞识别、代谢调节、免疫应答等功能。质膜蛋囱 质在药物研究中起着相当重要的作用，在已经发现的药靶中，大约有70％是质膜蛋囱质。最 近一项统计表明：单是作用耙点是l型或2型G一蛋自受体的药物就占所有药物的25％111；魇 Kimmel癌症研究中 膜蛋白质组的研究为癌症的研究提供了很多有意义的靶标，其中以Sidney 心(SKCC)疆。的研究最令人鼓舞。他们通过体内肺癌缀织以及固体瘤上皮细胞与俸外培养肺 癌细胞质膜相减蛋白质组的研究，找到了两种只在体内癌中特异表达的细胞膜表皮蛋白，从而 通过这两种蛋囱质的抗体携带纯疗或放疗药物特异地杀死瓣瘤细胞。 然而由于很多膜蛋白具有强疏水性，常用的用于全蛋白质组研究的方法在进行膜蛋白质 维研究时遇到了很大酶挑战，与此同时履膜较其毽缨溅器含登低，与其毽缨脆器魏线粒体膜、 核膜有相近的组成，且质膜结构复杂，有不同的结构区(如打开的膜片、膜管以及微区如“脂筏 (Lipid 组的0．5％，占质膜蛋囱质组的2％[31，这些均对质膜蛋白质组研究带来挑战。因而直到1998 年才正式开始系统的质膜蛋自质组研究【4j，其微区蛋融质组的研究更迟。不过最近凡年随着 ①蒺金顼基：嚣家“973”域强资助(CBS一102) ∞6 chuon(koAtuokaitmweil keji 一 nix9nauhcioliew 亚细胞技术的发展，新的膜蛋囱提取试剂和新的分离手段的利用，以及质谱灵敏度与分辨率的 中输入plasma 鉴定以及质膜蛋白质的生物学研究和新质蛋内的定位等几个方面来介绍质膜蛋白质组的研 究。 l 质膜及其微区的纯能秘纯度判断 质膜及其微区的纯化是质膜蛋白质组研究的第一步。常用的细胞膜纯化方法有离心法、 硅珠结合法、两相法、裔由流法以及亲和分离法等。离心法包括差速离心法和密度梯度离心 法。差速离心法是根据不同亚细胞器组分的颗粒大小不同、沉降速度不同而分离的，较难得到 基于各细胞器的密度不同而分离，因而可以得刘较纯的质膜；但这种方法常常有线粒体、内质 网的污染，且得率羝。硅珠结合法洱J‘憝通过黧离子硅胶与缨胞膜结含来增加细脆膜的密度 (大于细胞核)，从而沉在管底来与其他细胞器分离的；此法操作简单，得率也较高，假不能用 于缝织匀浆撵，氇存在内质瞬静污染。自由流电泳ls’以及两榴法洚J嘲都是摄据各细稳器的电 荷不同来分离的。两相法分离原理是：在一定浓度范围内两种高分子的亲水聚合物Dextran 表面电荷和亲水基团不同，使其在两相体系中分配在富含PEG的上相，而其他内膜主要分配 在下棚或界面；此法可褥纯度大于85％的质膜，可用予组织与细胞，且其得率嵩。在以细胞秀 材料的细胞膜纯化方面，最近报道的生物素一亲和素亲和纯化法可以