深海放线菌生淀粉酶基因的克隆表达及酶学特性研究.pdfVIP

第 13卷第 2期 生 物 加 工 过 程 V01．13No．2 2015年 3月 ChineseJournalofBioprocessEngineering Mar．2015 doi：10．3969／j．issn．1672—3678．2015．02．007 深海放线菌生淀粉酶基 因的克隆表达 及酶学特性研究 李丽珍 ，杨 键 ，田新朋 ，麦志茂 ，苏宏飞 ，龙丽娟 ，张 (1．中国科学院 南海海洋研究所 热带海洋生物资源与生态重点实验室，广东省海洋药物重点实验室， 广东 广州 510301；2．中国科学院大学，北京 100049) 摘 要：从深海放线茵Streptomycessp．SCSIO03032基 因组 中扩增到 1条含淀粉结合域的水解糖苷 13家族基因 amy032，该基 因编码氨基酸与已知蛋白一致性最高为67％。将amy032插入表达载体 pET32a启动子下游，构建重 组载体 pET—amy。重组质粒导入大肠杆菌Rosseta(DE3)菌株中，SDS—PAGE分析结果显示 目的基因成功实现异 源表达。Ni—NTA对重组酶进行纯化，并对其酶学性质进行表征。结果表明：重组淀粉酶AMY032的最适作用温 度为 50ac，最适 pH为 8．O，以可溶性淀粉为底物 时的 比酶 活为 (276±57)U／mg，K 为 0．02g／L，V… 为 70 me,／(L·rain)。Ca“能提高该酶的催化活性，Ni、cu”、zn 和Mn“对该酶有抑制作用。AMY032对生玉米淀粉和 生大米淀粉具有水解活性，其比酶活分别为(49~12)U／mg和 (39~l1)U／mg；扫描电镜结果显示AMY032使生玉 米淀粉的表面产生明显凹陷。 关键词：深海放线茵；基 因组挖掘 ；有机物降解；淀粉结合域；克隆表达 中图分类号：Q93；TQ925．1 文献标志码 ：A 文章编号：1672-3678(2015)02—0035—06 Cloning，expressionandcharacterizationofraw amylase genefromdeep-seaactinomycete LILizhen ，YANGJian ，TIAN Xinpeng ，MAIZhirnao ， SUNHongfei ，LONGLijuan ，ZHANGSi， (1．GuangdongKeyLaboratoryofMarineMateriaMedica，CASKeyLaboratoryofTropicalMarine Bio-resourcesandEcology，SouthChinaSeaInstituteofOceanoloyg ，ChineseAcademyofSciences，Guangzhou510301，China； 2．GraduateUniversityofChineseAcademyofSciences，Beijing100049，China) Abstract：The glycosidehydrolasefamily 13 gene amy032，deduced amino acid sequenceofwhich exhibitedhighestidentityof67％ withknown protein in GenBank，wasamplifiedfrom adeepseastrain Streptomyces sp．SCSIO 03032．The mature gene was inserted into pET32a under T7 promoter． RecombinantvectorwastransformedinEscherichiacoliRosetta(DE3)ceils，andSDS—PAGEanalysis resuhsshowedthatt