抑制消减杂交筛选仔猪ETECK88ab%2fac受体候选基因.pdfVIP

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2017-08-13 发布于安徽
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抑制消减杂交筛选仔猪ETECK88ab%2fac受体候选基因.pdf

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猪遗传育种抑制消减杂交筛选仔猪ETECK88ab／ac受体候选基因徐如海，胡锦平，翁经强，褚晓红，戴丽荷，路伏增，黄少珍浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，浙江省畜禽遗传育种重点实验室，杭州310021 关键词：抑制消减杂交；仔猪ETECK88ab／ac受体基因；候选基因引言从候选基因角度研究仔猪ETECK88ab／ac受体基因是一个重要思路。本研究以全同胞仔猪为研究对象，在分析其小肠粘膜粘附ETECK88粘附表型的基础上，利用抑制消减杂交技术，构建仔猪小肠粘膜细胞表达基因的正反消减cDNA文库，通过差异筛选、测序、BLAST分析，直接分离仔猪ETECK88抗性候选基因。本研究项目的开展将为猪肠毒素大肠杆菌K88抗性基因的研究提供一个“候选基因平台”，为这个基因的最终克隆奠定坚实的物质基础。材料方法利用ETECK88ab／ac黏附性状数据的大白全同胞仔猪小肠样品(中国农业大学动物科技学院张勤教授惠对提取的总RNA进行纯化；用QIAGEN的mRNAMidi 的PCR．selectTMcDNASubtractionKit构建正反向抑制消减文库。利用放射性同位素杂交方法对正反向抑制消同源比较。对已有基因对应的EST，结合所其对应基因的BLAST结果、染色体定位结果以及已有仔猪ETEC K88受体基因定位在13号染色体上的结果及人3号染色体和猪13号染色体同源的结果进行筛选，以确定仔猪ETECK88ab／ac受体候选基因。结果两个已有研究结果最终筛选到2个仔猪ETECK88ab／ac受体候选基因。见表1。表1筛选到的三个候选基因讨论与结论猪Integrin beta-5 属于整合素家族，编码细胞表面糖蛋白，其主要功能为参与免疫细胞的粘附作用。猪RPL29基因位于猪13号基因编码组成60S大亚基的细胞质核糖体蛋白，该蛋白属于核糖体蛋白L29E家族成员，是一个在细胞表面表达直接结合肝磷脂的外周膜蛋白。该蛋白具有多种生物学功能，如RNA结合、肝磷脂结合、蛋白结合和组成核糖体的结构等分子功能，参与胚胎附植、翻泽等多个生物学过程。因此，对筛选到得这两个基因需要进行进一步研究如荧光定量PCR分析、基因转染和基因沉默等以确定其是否为仔猪ETECK88ab／ac受体基因。致谢资助。感谢中国农业大学动物科技学院张勤教授惠赠仔猪小肠样品。 ·一325·一