牦牛钙激活蛋白酶抑制蛋白CAST基因克隆与其测序分析.pdfVIP

分子系统学、进化与资源评价 牦牛钙激活蛋白酶抑制蛋白CAST基因克隆及其测序分析 王建华，吴建平，费春红，杨联，张利平丰 甘肃农业大学动物科学技术学院，兰州730070 关键词：牦牛；钙激活酶抑制蛋白；基因克隆 引言 牦牛是生存于青藏高原，海拔3000米以上的特有畜种，牦牛肉符合天然食品标准，具有广阔的市场前景。 力值大于4．1，使牦牛肉产品的开发和市场价格受到很大影响。研究表明，钙激活酶(CAPN)，钙激活酶抑制 蛋白(CAST)系统在动物屠宰后肌肉的成熟过程中起作用，钙激活酶在钙离子激活下降解肌纤维，是肌肉嫩 化的主要酶。钙激活酶抑制蛋白是细胞内专一抑制钙激活酶活性的蛋白质，通过抑制其活性，可抑制肌肉内 蛋白质降解，参与肌肉生长过程中蛋白质的更新。分子水平研究表明CAPN和CAST基因是肉质性状的候选 基因。本研究克隆和分析牦牛CAST基因序列，以期为进一步研究CAST基因与牦牛肉嫩度的关系，探寻与 影响牦牛肉嫩度主效基因紧密连锁的遗传分子标记奠定基础。 材料与方法 5-tgcgtctctcggaacacat-3’，P1．D5-ctgattcactcaggggcttg一3’；P2-U 进行同源性比较和分析。 结果 测序结果表明克隆获得了牦牛CAST基2445 bp 86％、83％、和75％。遗传距离计算结果表明，牦牛与牛亲缘关系最近，遗传距离最小；与绵羊次之，而与猪、 人、家鼠的亲缘关系依次变远，遗传距离随之增加。牦牛与牛相比，CAST基因中有18个核苷酸变异，其中 7个造成了氨基酸的变化，3个发生在CAST第一结构域，即L结构域；1个发生在第二结构域，即结构域I； 2个发生在第五结构域，即结构域Ⅳ。 讨论 牦牛CAST基因的编码区核苷酸序列与牛、羊、猪的同源性都超过了86％，表明该基因编码区核苷酸序 列在物种问具有较高的保守性。牦牛CAST基因与牛CAST基因相比，7个核瞢酸变异造成氨基酸的变化， 分别分布在牦牛CAST蛋白的L、I、IV结构域。John 基因蛋白序列组成上的不同可能造成牦牛CAST蛋白结构变化，从而使其抑制作用有所改变，成为牦牛肉嫩 度差的原因之～，值得深入研究。 致谢 、‘ 本研究受甘肃省教育厅科学技术研究项目(0502．01)资助。 幸通讯作者：E—mail：zhangliping@gsau．edu．crl 一87—