抑郁症模型大鼠代谢指纹谱色谱分析.pdfVIP

全国生物医药色谱学术交流会(2010)论文集 C23抑郁症模型大鼠代谢指纹谱的色谱分析 郑姝宁虞明阳张上上葛琳杨静玉李发美幸 沈阳药科大学药学院沈阳10016 代谢组学作为系统生物学一个新的分支，研究生物体系受外部刺激而产生的所有代谢产物 的变化及其动态变化的规律，是探索机体代谢活动本质的--I-J科学【l】，已广泛地应用于疾病研 究和药物开发等领域∞l。根据研究的对象和目的的不同，代谢组学分为4个层次，即代谢物 靶目标分析、代谢轮廓谱分析、代谢组学和代谢指纹分析【4】。其中代谢指纹分析是其常用的研 ， 究手段之一。 代谢产物的检测、分析与鉴定是代谢组学技术的核心部分。超高效液相色谱(UPLC)具有 更快的分析速度、更高的峰容量和更高的灵敏度，与质谱(MS)联用可以得到代谢组分的结构 信息。气相色谱(GC)具有高柱效、快速分离的特性，同时氢火焰离子化检测器(FID)具有灵敏 度高、体积小、响应快、线性范围广等优点。UPLC／MS和GC／FID技术很好地实现了对大量 样品和微量代谢物的快速分析。 ． 本研究首先建立了基于UPLC／MS的方法测定大鼠尿液代谢指纹谱。尿液经水稀释后进行 UPLC／MS测定，得到大鼠尿液代谢指纹谱(图1)。方法学考察表明该方法具有良好的重复性、 稳定性和精密度。同时本研究建立了基于GC／FID的方法测定大鼠血浆代谢指纹谱。血浆经沉 淀蛋白后，正己烷去除磷脂，采用氯甲酸乙酯对血浆中含羟基、羧基、氨基等基团的化合物进 行衍生化【5J，衍生化产物用氯仿提取并浓缩后进行GC／FID测定，得到大鼠血浆代谢指纹谱(图 2)。方法学考察表明该方法具有良好的重复性和稳定性，且衍生化完全。应用所建立的 UPLC／MS和GC／FID分析方法分别测定了抑郁症模型组和正常组大鼠的尿液和血浆代谢指纹 谱，经主成分分析，在两种分析方法下两组大鼠在PCA得分图上均明显分开。由PCA因子载 荷图得到与抑郁症相关的潜在的生物标记物。抑郁症大鼠尿液中的潜在生物标记物为色氨酸、 苯丙氨酸、马尿酸、犬尿烯酸等，血浆中潜在的生物标记物为乳酸、色氨酸和多不饱和脂肪酸 等。这些潜在的生物标记物提示抑郁症的病理机制可能与氨基酸代谢、脂肪酸代谢、能量代谢 和肠道菌群的紊乱有关。 本研究利用UPLC／MS以及GC／FID色谱技术测定了抑郁症模型大鼠的血浆和尿液代谢指 纹谱，得到抑郁症模型潜在的生物标记物，成功地应用于抑郁症的病理机制研究。 114 全国生物医药色谱学术交流会(2010)论文集 图1大鼠尿液UPLC／MS代谢指纹谱 ●●●llf●●l‘l■■lll【uⅡFr■■■■■■■^iujj二iji 乙． 』U ¨龇 —f一一—1●一一i一—————r——————i——————1r——————?———== 图2大鼠血浆GC／FID代谢指纹谱 参考文献 themetabolic of responsesliving to viamultivariate stimuli statisticalof