去乙酰化酶抑制剂Scriptaid显著提高西臧小型猪克隆胚胎体外发育囊胚率.pdfVIP

第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集 去乙酰化酶抑制剂Scriptaid显著提高西藏小型猪克隆胚胎体外发育囊胚率 樊娜娜，赵本田，欧阳振，宋军，杨东山，赖良学 中科院再生生物学重点实验室，中国科学院广州生物医药与健康研究，广州510663 关键词：去乙酰化酶抑制剂： Scriptaid：体细胞核移植；猪 引言 供体核移入去核MII期卵母细胞后表观遗传学的不完全重编程和重编程异常被认为是体细胞克隆技术效 率低的一个重要原因。研究表明以去乙酰化酶抑制剂trichostatinA(TSA)处理小鼠，猪，牛，兔等克隆胚胎 能够显著提高其体外发育囊胚率，并能提高克隆小鼠的出生率。但是TSA具有一定的毒副作用，而且在其他 物种中的效果不如小鼠中明显。Sciptaid为一种人工合成的低毒性去乙酰化酶抑制剂。以往的研究发现，以 Sciptaid处理近交系小型猪克隆胚胎能够提高克隆胚胎体外发育囊胚率及出生率。但是对其最适处理浓度和最 佳处理时间尚不得而知；以Sciptaid处理细胞做为核移植的供体能否提高体细胞克隆胚胎外发育囊胚率也未 见报道。为了阐明以上两个科学问题，本研究以不同Scriptaid浓度和不同的时间处理以西藏小型猪成纤维细 的最适处理方式。 材料方法 从妊娠35—40天的西藏小型猪胎儿分离胎儿成纤维细胞作为核移植供体细胞。由屠宰场收集卵巢，卵母 nM， 细胞体外成熟42～44小时作为核移植受体卵。以Sciptaid处理核移植后克隆胚胎，设置不同的浓度(10 50nM，100nM，200nM，300nM)处理24小时，筛选出能够有效提高克隆胚胎体外发育囊胚率的最佳处理 h，24h，48 浓度；再以筛选出的最佳处理浓度设置不同的处理时间(O，14 h)筛选出最佳的处理时间。为了 nM，500 nM)的Sciptaid处 验证以Sciptaid处理供体细胞对克隆胚胎体外发育的影响。以不同浓度(0，100 理供体细胞24h后进行核移植，观察处理供体细胞对体外发育囊胚率的影响。 结果 nM，300nM 分别以100nM，200 Sciptaid处理克隆胚胎后，实验组与对照组相比克隆胚胎的囊胚形成率 均显著提高，其中以100 100nM处理重构胚胎0，14h，24h，48h，与对照组相比，处理24h能够显著提高体外发育囊胚率，处理14 nM处理处理孤雌胚24h，其囊胚形成率与对照组相比无显著差 h及48h对囊胚的形成率无显著差异。以100 nM nM，500 异(对照组46．5％vs处理组42．2％，Po．05)。分别以100 h，该细胞进 Sciptaid处理供体细胞24 行核移植后体外发育囊胚率分别为16．5％和14．0％，对照组为19．8％。处理组与对照组囊胚率在统计学上没有 差异，但可以看出处理组囊胚率下降。不论是以Sciptaid处理克隆胚胎还是处理供体细胞对克隆胚胎体外发 育卵裂率及囊胚细胞总数都没有影响。 讨论和结论 本研究表明，虽然去乙酰化酶抑制剂Sciptaid处理供体细胞并没有能够提高猪体细胞克隆胚胎体外发育 nM的浓度处 囊胚率，但Sciptaid处理猪体细胞克隆胚胎能够显著地提高囊胚形成率，重构胚激活后，以100 理24小时，能够获得最理想的效果。本研究结果为最终利用乙酰化酶抑制剂Sciptaid来提高克隆猪的生