通过敲除leptin基因建立小型猪肥胖疾病模型.pdfVIP

SeventhNationaConferenceofAnima 。，霹 黧漱黧辫鬻研讨nologyThe暨新疆畜牧科学院第六次学术年会—dg蒜，‘选，Biotechnolocly镰 通过敲除leptin基因建立小型猪肥胖疾病模型 宋致远，于胜利，温啸，李秋艳，李宁 北京市海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼，100193 摘要：过去研究表明，Leptin基因在糖尿病相关的血糖和脂肪代谢通路中起到重要作用，leptin突变小鼠模 型被广泛用于肥胖疾病相关的药物测试。新的研究发现已有的leptin突变小鼠模型在患者临床糖尿病药物 试验中，未能反映出治疗药物诱发心脏病的副作用。小型猪作为模型动物，与人类的脂肪积累方式和药物 敏感度更接近。因此为了建立更适合人类肥胖症的疾病模型，本研究以小型猪为模式动物进行leptin基因 敲除。本研究基于基因定点修饰的新技术，如锌指酶或TALEN技术，实现leptin基因定点突变。再通过体 细胞核移植技术，建立leptin基因敲除的克隆猪，并且借鉴人类和小鼠模型的临床检测手段进行各项生理 生化指标的诊断。本研究旨在建立与人类亲缘关系更近的猪肥胖疾病模型，为提供动物模型用于疾病治 疗、药物筛选等医学研究奠定基础。 引言 随着人民生活水平的逐渐提高，肥胖已经成为危害人类健康的常见元凶。它还会导致多种生理和心理 疾病，如二型糖尿病，心脑血管疾病等。肥胖相关的Leptin基因在糖尿病相关的血糖和脂肪代谢通路中均 起到重要作用。本研究正是为了弥幸l-d,鼠模型在肥胖症上与人类发病情况、药物反应的不同，希望建立与 人类同源性更高的小型猪模型用于研究肥胖相关的疾病，填补国内外相关研究的空白。 材料方法 本研究采取新型的锌指核酸酶(ZFNs)技术和TALEN技术等高效定点基因修饰的方法，并在其中择 优使用，对leptin基因进行快速高效的定点删除。通过基因敲除和转基因克隆技术获得阳性敲除猪后，需 要对其进行详尽的生理生化指标测定。以明确leptin蛋白的缺失对于小型猪的生长发育的影响，以及肥胖 症等疾病相关的病理检测结果。 结果 1)构建了使用锌指核酸酶等新技术生产基因敲除猪的技术平台； 2)对FO代leptin基因敲除猪进行了分子检测，确定其基因型和表达量； 3)t在对F0代leptin基因敲除猪进行糖代谢和脂代谢相关的生化检测和病理检测。 讨论 的大动物研究却很少。Leptin基因突变与人类多种疾病直接或间接相关，最主要的研究路线就是通过影响 下丘脑的内分泌，来影响人体的食物摄入和能量消耗。而糖代谢和脂代谢的异常，则会导致肥胖症、高血 脂症、慢性肾功能不全乃至糖尿病及不孕的严重症状。我们的试验正是从leptin基因定点突变开始进行， 得到leptin功能缺失的模型猪。通过这些猪的各项情况，对人类的相关疾病研究、临床治疗和药物测试都 有较大的参考意义。 致谢 感谢我的导师李宁教授对本课题的悉心指导和关心!感谢本实验室及合作单位所有老师、同学、工作 人员对本课题的帮助和支持，在大家的支持下我才得以顺利完成这些工作。 ’ ， 135