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两种能源微藻的相关研究 薛松 大连化物所 开拓和发展新型的生物质资源，为我国可再生能源开发提供足够的生物质原 料，是解决我国能源短缺、保证社会经济可持续发展的重要途径。作为一种新型 水生生物质资源，微藻生产生物柴油等可再生液体燃料，具有光合作用效率高、 生长周期短、生物质产量高、油脂含量高、具综合利用价值，且不与粮争地、不与 人争粮等特点。在能源生产的同时，微藻还能以工厂废气中的二氧化碳为碳源， 并可利用盐水、污水等边际水体进行养殖，从而兼具COR。。减排和环境治理的功能。 因此，规模化微藻制取生物柴油具备解决我国可再生液体燃料短缺的巨大潜力。 为了使微藻的特点实用化，进行了如下的研究： 以亚心型四爿藻与金藻为模式藻，在高密度培养技术一光生物反应器优化一 微藻低成本规模培养相结合的框架下，(1)开展了海洋微藻高效高密度培养技术 的研究。对海洋微藻的高效、高密度培养进行深入研究，获得了包括投料方式、 pH值、光度、温度等条件的影响规律。实现微藻(以亚心型四爿藻为模式藻)实 验室培养15天最高达到1000万／ml藻密度，小试反应器培养密度10天达到 400-600万／ml藻密度。(2)建立了微藻有效成分及各种活性物质分析平台。(3) 设计构建了不同构型及成系列的光生物反应器并进行优化。(4)构建了微藻可控 的高效、高密度集约化培养的低成本中试装置。 以海洋绿藻一亚心型形四爿藻 (Tetraselmis 控产氢为模式，在藻种筛选一基因一调控方法一调控机理一工程基础相结合的框 架下，(1)开创了海洋绿藻一亚心型扁藻解偶联剂调控产氢研究。建立了包括七 株淡水和六株海水藻在内产氢藻种库。对库内绿藻进行考察，发现武汉衣藻、亚 心型四爿藻、塔胞藻等均能产氢，其中海洋亚心型四爿藻原始产氢能力与美国淡 水藻(ccl24)相当。(2)对亚心型四爿藻产氢代谢调控的多种方法研究表明，PSII 活性的抑制可提高扁藻产氢能力。其中解偶联剂CCCP调控可使亚心型四爿藻产氢 能力提高为原始产氢能力的100倍。(3)亚心型四爿藻解偶联剂调控产氢相关工 艺参数的优化。利用工程技术手段，实现了海洋绿藻光照产氢工艺条件的优化， 实现高浓度(8×106cells／m1)亚心型四爿藻的高效产氢及其重培养再产氢；对亚 心型四爿藻的培养条件，氢酶诱导方式与时间，亚心型四爿藻产氢的影响均作了 考察研究。采用现阶段优化的工艺参数，亚心型四爿藻解偶联剂调控产氢的产氢 相比较，产氢总量提高了上千倍。(4)应用免疫和质谱法对亚心型四爿藻氢酶蛋 白进行亚细胞定位和分类，建立了亚心型四爿藻遗传转化体系，实现了外源基因 的稳定表达。(5)优化了亚心型四爿藻氢酶无氧破碎提取方法，完成了亚心型四 爿藻氢酶的分离纯化，研究并考察了不同反应条件下亚心型四爿藻氢酶的酶学特 征，为藻种的选育和产氢的代谢调控提供了基础数据。(6)建立了细胞内和胞外 关键代谢物质包括蛋白、淀粉、有机酸、醇和辅酶等的检测方法，建立了微藻有 效成分及各种活性物质分析平台，获得了不同培养条件下亚心型四爿藻细胞生理 生化条件对产氢的影响和调控规律。阐述了海洋绿藻解偶联剂调控产氢的代谢机 理及代谢网络，为开发新的绿藻光解水产氢调控技术奠定了基础。 研究调控了一种绿藻的淀粉含量，结果从20％调控到50％，研究调控了一种 金藻油脂的含量从20％至U45％，也可调控其可溶性糖到40％以上。