氧化钛生物传感器对磷酸化蛋白分析研究.pdfVIP

氧化钛生物传感器对磷酸化蛋白的分析研究 纪季，万晶晶，乔亮，陈惠，张松，孔继烈，刘宝红* （复旦大学化学系，上海200433 ，Email:bhliu@fudan.edu.cn ） 疾病在不同生理状态下蛋白标志物的发现和研究已成为多年来研究的重点，生物标志物 的发现对疾病的诊断和治疗有着重要作用。磷酸化作用是主要的蛋白质后修饰作用之一，蛋 白质的磷酸化和去磷酸化控制着一系列极为重要的生物过程，例如细胞生长、信号传导、蛋 白降解标记以及新陈代谢等。蛋白激酶催化下的蛋白质磷酸化在细胞生长、凋亡、响应外部 信号等信号传导过程中起到了很重要的作用。在已发现的500 多种蛋白激酶家族中大部分证 明与癌症的发病机制有关，因此研制简易的生物传感器用于激酶及其底物和抑制剂的识别检 测非常必要。近几年的研究表明纳米二氧化钛对磷酸化蛋白有特异性的捕获作用，我们利用 纳米二氧化钛作为识别激酶作用底物的信号传导介体，在紫外光作用下，通过光催化还原反 应在二氧化钛表面生成纳米银，进行信号放大检测。此传感器不但成功地检测了激酶作用活 性，并对激酶抑制剂的检测结果良好。此外，为了从分子层面上对这些作用进行了解，必须 首先实现对磷酸化蛋白结构的测定。近年来，生物质谱已经被广泛用于蛋白结构的研究，然 而磷酸化肽段相对较低的丰度和较差的离子化能力使得有效地对磷酸化蛋白进行结构测定 非常困难，因此设法对磷酸化肽段进行预先分离富集就非常重要。为此我们发展了一种基于 基质辅助激光解吸离子化的原位磷酸化肽段富集方法，实现了功能靶板上的样品分离富集。 实验结果表明，该方法具有很高的选择性和灵敏度，可以在短短几分钟内实现低至fmol 的 磷酸化肽段分离富集和检测。 本研究为国家自然科学基金资助项目。 参考文献： [1] B.T. Houseman, J.H. Huh, S.J. Kron, M. Mrksich, Nat. Biotech. 2002, 20, 270. [2] M. Shults, K. Janes, D. Lauffenburger, B. Imperiali, Nat. Methods, 2005, 2, 277. [3] Ji J, Yang H, Liu Y, Chen H, Kong JL, Liu BH. Chemical Communications 2009, 1508. [4] Wan JJ, Qian K, Qiao L, Wang YH, Kong JL, Yang PY, Liu BH, Yu CZ. Chemistry-A European Journal 2009, 15, 2504. [5] Qian K, Wan JJ, Liu F, Girault HH, Liu BH, Yu CZ. ACS Nano. 2009, 3, 3656.