柱前衍生化─气相色谱%2f质谱法测定细胞中壬基酚.pdfVIP

第四届全国环境化学学术大会论文集(上册) 柱前衍生化一气相色谱／质谱法测定细胞中壬基酚 高子桑1鲜放鸣’韩晓冬2潘旭萍2于红霞1’ (1南京大学环境学院，污染控制与资源化研究国家重点实验室，南京，210093 2南京大学医学院，免疫与生殖生物学实验室，南京，210093) 摘要 壬基酚(nonylphenol，NP)是一种广泛使用的人工合成化合物，在众多环境样品中均有捡出，具有内 分泌干扰活性。为进一步在细胞水平上研究其作用机制，本文建立了一种柱前衍生化—气相色谱／质谱法测 定细胞及细胞质中NP含量的方法，以探讨NP在细胞中的分布．方法的仪器检测限为5．7ng／ml，不同介质 中加标回收率在76．5％98．9％之间．利用本方法测定实际样品，发现在浓度为10¨M和20pM的NP溶液 中暴露12h，I旷个细胞中NP含量分别为21．0和43．0 ng，而相应的细胞质中NP含量分别为14．2和28．4ng． 该方法的建立为研究壬基酚在细胞内的分布特征及由此产生的剂量．效应关系提供了技术支持。 关键词 壬基酚；衍生化；气相色谱／质谱：细胞 0引言 壬基酚(nonylphenol，NP)是一种广泛使用的人工合成化合物，在天然水体、污水、沉积 物、水生生物等样品中均有检出。目前已经有文献【1112Ji正阴NP具有雌激素活性，NP已成为 公认的内分泌干扰物，关于NP的研究已成为环境学家关注的热点。为深入地研究NP在细胞 中的作用机制，就必需在细胞水平上进行NP的测定。文献131中曾报道过测定NP暴露下的小 鼠肝细胞中NP的总含量，但并没有分析NP在细胞内的分布情况。有鉴于此，本文以壬基酚 众多异构体中较为常见的异构体对直链壬基酚(4．n．NP)为模型化合物，建立了一套分析细 胞中以及细胞质中NP含量的分析方法，以提供一个研究NP在细胞中分布的有效方法，为研 究NP的细胞毒性剂量．效应关系奠定基础。 1材料与方法 1．1 细胞及细胞质的获取 本实验测试的小鼠生殖细胞来自南京大学医学院免疫与生殖生物学实验室，并由该实验 室进行细胞质的分离。 1．2 样品的预处理 分别离心细胞悬液和细胞质提取物，弃去悬浮物保留上清液，调节pH到2．3之同；加 入正己烷分别萃取3次，离心收集3次萃取液，浓缩后加入定量内标物丁基酚500 ng，加入 0．10 衍生化试剂BSTFAml，60℃水浴反应30min，正己烷定容后进行GCMS分析。 1．3 GC／MS分析 采用美国FinnganGCQ气质联用仪，进样口温度280(2，不分流手动进样l此，传输线 era／see。 温度260℃，离子源温度210℃，离子扫描范盈(m／z)为50,--350，载气为氦气，线速度40 min，再以15℃／min 升温程序如下：初始温度80℃，以12℃／min的速度上升至220℃后保持2 的速度上升至300。C后保持12min。样品采用SCAN模式分析，根据化合物的保留时间和质 谱图进行定性，定量则在S1M模式下进行，选择BP衍生物和NP衍生物的定量特征离子 m／z179、m／z222和m／z179、m／z292，以BP衍生物为内标，利用内标法定量。 2结果与讨论 2．1 标准曲线制作 在6个2111l玻璃离心管中分别添加50、100、250、500、1000、2000ng的NP标样， 同时每容器中均添加内标BP500 min后定容后上机 ng，与衍生化试剂在60C水浴下反应30 测试。得到不同浓度下NP衍生物与BP衍生物的峰面积的比值，并根据NP和BP的质量比 ’通讯联系人：Email：Y迪∑盆Ⅱi!!￡盘鳃：国家自然基金项目 76 第四届全国环境化学学术大会论文集(上