冷冻切片制作技术的探讨.pdfVIP

2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 染出高质景的切片，必须注意以下几点：1、切片在染色程序Ij{f必须彻底脱蜡。一般要经过三缸■甲 苯，再经梯度乙醇全流水冲洗。。冲洗后的玻片应透亮；2、苏木素染色lj{f注意去除苏木素表面上形成 的氧化膜，苏木素染色要过染，盐酸乙醇分化要恰到好处，这样胞浆的伊红染色才能较好着色；3、 必须保持每一道试剂的纯度，经常更换试剂。 九、封片、贴标签 封片常见的问题是有气泡、有溢液。主要是封片操作小熟练和封片剂滴得过多。山于_甲苯对身体 有害，无自动封片机的技术室，脱水后可以省去■甲苯透明的步骤，经脱水片子干燥后卣接用中性树胶 封片。封片时中性树胶用最要适中，盖玻片要有点角度斜着轻轻的盖下去。有气泡时需小心挤去片中的 气泡，擦干溢出的树胶，贴上标签，核对无误即可出片。 总之，常规病理技术工作中如果没有严格的质．阜=控制，在接收标本、登记编号、取材、同定、脱水、 透明、浸蜡、包理、切片、染色、封片等全过程中易出现各种各样的问题。任何一个环节的疏忽，都可 能影响最终的结果。作为一个合格的病理技术工作者应该知道出现这些问题的原冈，对症下药，正确解 决，从而保证制片的质量，以利于临床病理诊断。 冷冻切片制作技术的探讨 5005 庞霞郑湘予尹玉慧宋一民陈振光陈奎生(郑州大学第一附属医院病理科4 2) 冷冻诊断技术由PieterdeRieBer于1818年首创，借助低温使于术中的新鲜标本快速冷冻，达 到一定的硬度后进行切片。但由于多种因素影响冷冻切片的质鼍，从而影响病理诊断的准确性。经过多 年实践，我们从标奉取材、速冻、切片、同定、染色到封片等步骤着手，摸索出一些提高冷冻切片质量 的可行方法。 l、材料 来自郑州大学第一附属医院新鲜于术标本。 2、方法 2．1取材将未经过任何试剂处理的新鲜组织标本切成2∞X2锄×0．2锄大小的组织块，组织取的过 大或过厚会延长制片时问。尽最少带或不带脂肪或坏死组织，切面要平整。囊性组织内有很多液体，不 要用水冲，以免产生冰品影响诊断，取囊壁的宽度为0．3cnl。 2．2速冻 2．2．1包埋剂在T作中常用的有三种：OCT包埋剂、胶水和水。OCT成奉人高，水容易形成水品，胶 水经济适用，彳i影响切片的质罩，是一种很好的包埋剂。 2．2．2包埋方法把取好的标本迅速放在已经预冻好的冷冻头上，注意冷冻头从消毒液中取出，晾干 再预冻，使它与组织块结合更’ii同。囊肇组织先把它卷曲成团，立着放在预冻好的冷冻头上。若遇到组 织人小的标本时，胶水先放在冷冻头上，待胶凝同时将组织放上，再加一些胶水冷冻，这样组织被垫高， 切片质罩更好。值得注意的是胶水涂的面积应该大于组织，这样的片了彳i易卷曲。 2．2．3冷冻条件山于符种组织的结构／1i同，故冷冻的温度和时问也有所小同，如表l 2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 2．3切片 由于标本冷冻后，其硬度不一，故技巧是制成优质切片的关键步骤。 2．3．1切片小完整组织中过多的脂肪、坏死组织和纤维成分引起组织过硬或组织过脆影响制片。另外 还要掌握冷冻的温度和时间：切片的速度稍微快点。 2．3．2切片皱缩和卷缩刀锋变钝或刀上粘有异物，切片时，组织冈受挤压缩在一起。根据情况换刀位， 并且清除切片刀和冻台上的异物。其次，刀锋与冻台的角度不协调，切片时发生卷落。因此，应调整好 切片刀与冻台的角度。 2．3．3切片脱落冷冻切片是利用温度差将切片粘贴在玻璃片上，切好的片了在染色之Ij{『，先把组织与 片子的粘贴处放在于背上数秒，增加温度差使其结合更牢固。除此之外，载玻片不干净、切片太厚、组 u 织内含过多的脂肪及坏死组织，都可造成脱落。保持载玻片干净、调整好切片厚度6 m左右，注意取 材的位置。 2．4．固定 固定对染色起决定作用，不要急于染色而忽略同定，混合同定液包括95％酒精85ml、甲醛 lOml、冰醋酸5ml。这种同定液对组织有较强的穿透力，可使细胞内的蛋白质沉淀并防止组织过度收缩， 具有同定速度快、渗透力强、胍染色鲜艳、组织结构清晰等优点。固定液要新鲜、不要加热防脱片，根 据组织情况决定固定时间。 2．5．染色及封片 染色方法为HE染色法，步骤如下：(1)固