系统性红斑狼疮(SLE)的表观遗传发病机制，早期生物学标记与治疗目标.pdfVIP

中华医学会第十四次全国皮肤性病学术年会·免疫 好，而无戈登氏征的皮肌炎患者的肺损害重，预后差。对诊断为ADM(无肺等器官累及)的患者我们建 议不宜采用大剂量糖皮质激素和细胞毒药物治疗，以避免严重的并发症，而应仔细寻找原因，区别对待。 系统性红斑狼疮(SLE)的表观遗传 发病机制，早期生物学标记和治疗目标 陆前进 中南大学湘雅二医院皮肤性病科中南大学湘雅二医院表观遗传研究中心 中南大学皮肤性病研究所 随着人类基因组计划的完成，这本由ATCG组成的生命天书已经摆在了所有生命科学领域科学家 的案头，正确理解和阅读这本书已经成了生命科学的当务之急。表观遗传学研究是破译这本生命天书 的有效工具。其涉及的机制主要包括DNA甲基化，组蛋白修饰及染色质重塑。DNA修饰主要是胞嘧 啶的甲基化，DNA甲基化导致基因沉默。组蛋白尾部修饰可影响组蛋白与DNA双链的亲和性而改变 染色质的疏松或凝集状态，还可以影响与染色质结合的蛋白质因子的亲和性，影响识别特异的DNA序 列的转录因子与之相结合的能力，对基因表达调控具有类似DNA遗传密码的作用，故被称作“组蛋白 密码”，其中组蛋白乙酰化和甲基化尤为重要。 DNA甲基化在T细胞基因表达调控和维持T细胞正常功能中起重要作用。近年来我们的研究结 果表明DNA甲基化水平低下的成熟T细胞在体外具有自身反应性，在体内能复制出狼疮样模型。用 CDlla、CD70、Perfofin、IgEFcR,／1均在活动性SLE 0．001，P0．001)。亚硫酸盐基因组测序证实了活动性SLET细胞和经5一氮胞苷处理的正常T细 抑制这些基因的活性。用实时定量RT—PCR和流式细胞仪的方法比较甲基化转移酶抑制剂(5一氮胞 研究结果显示CDlla过度表达的T细胞具有自身反应性，在小鼠体内能复制出狼疮样模型；CD70过度 表达辅助自身B细胞产生大量自身抗体；Perforin过度表达的T细胞杀伤自身的巨噬细胞；过度表达的 IgEFcR一、／I导致TCR信号异常。 为什么SLE在女性高发呢?众所周知，男性只有l条x染色体，而女性拥有2条染色体，其中1条 处于失活状态，DNA甲基化是x染色体失活的重要机制之一。CD40LG是x染色体编码基因，我们的 研究结果显示CD40LG仅在女性活动性SLE 显示正常男性C1MOLG启动子和下游增强子几乎全部去甲基化，而女性一半为甲基化、一半为去甲基化 (P0．01)，且女性SLE 甲基化而上调女性CD4+T细胞CD40LGmRNA及蛋白的表达，而对男性无明显影响(P分别=0．03，P B细胞产生大量自身抗体。因此，我们可以推测失活的x染色体上CD40LG因其启动子和下游增强子 低甲基化而被重新激活，使女性过度表达CD40LG，从而产生自身抗体，使女性狼疮易感性增加。 一86— 中华医学会第十四次全国皮肤性病学术年会·免疫 目前对SLE的组蛋白修饰研究主要集中在动物模型方面，我们通过研究发现，系统性红斑狼疮患 者CD4+T细胞组蛋白H3／H4存在不同程度的低乙酰化状态，组蛋白H3K9甲基化水平也显著降低， H3K4甲基化水平无明显改变。另外我们通过实时定量RT—PCR(real—timeliT—PCR)法检测CD4+ +T细胞中也存在组蛋白修饰酶的表达异常，大体与SLE中相似，与野生型MRL／MPJ小鼠相比，MRL— mRNA显著降低，仅去乙酰化酶 lpr／lpr狼疮鼠CD4+T细胞P300，PCAF，HDAC7，SUV39H2和EZH2 白H3、H4低乙酰化和H3K9低甲基化状态可能去组蛋白修饰酶共同作用的结果。 抑制去乙酰化酶这一途径已成功应用于多种自身免疫性疾病。在MRL—lpr／lpr狼疮鼠模型中， 虽然能通过抑制去乙酰化酶的表达，却由于其细胞毒作用而限制了在临床的使用。迄今为止，靶向 HDAC的RNAi技术用于治疗自身免疫性疾病的研究还鲜有报道，SLE患者和狼疮鼠均存在广泛的I类 和II类去乙酰酶的表达降低，独SIRTI 的蛋白去乙酰化酶类，对细胞的生存、凋亡、衰老等生理活动起着十分重要的调节作用。我们采用流体 注射法将SIRTI—siRNA导入小鼠体内，发现其转染24h后小鼠CD4+T细胞表达SIRTlm