1%2c25-(OH)2D3对人肝癌细胞增殖影响.pdfVIP

182 中国癌症研究进展⑥ 1，25一(OH)：D3对人肝癌细胞增殖的影响 骆文静王文亮陈景元王枫李波陈耀明 l，25一(OH)：码是维生素D3的激素形式，其作用方式和其他类固醇激素一样，通过特异 受体介导并通过维生素D受体之间的相互作用来调节基因的表达。新近报道显示，1，25一 (oH)：玛的生物学活性除了能调节体内的钙磷平衡和维持内环境稳定外，对细胞的增生和分 化有一定的调节作用。l，25一(OH)，珥可诱导多种髓系白血病细胞系及正常髓系干细胞发生 终末分化，并可使白血病小鼠存活时间明显延长，因此维生素D具有治疗白血病等过度增生 性疾病的潜在可能性。最近，在许多良性及恶性肿瘤中发现了维生紊D受体，认为1，25一 (oH)：职可抑制多种人的肿瘤细胞的增殖，其中包括肺癌细胞…，前列腺癌细胞“Jo，结肠癌 细胞“1和白血病细胞o】。但是关于1，25一(oH)：现对肝癌细胞的作用尚少见报道。本研究 殖及细胞凋亡的影响。 材料与方法 (一)细胞株与细胞培养 氧化碳，37℃培养箱中培养。 (二)细胞毒试验(Mrr法) mnol／L，然 待细胞长成单层后，换以含1，25一(oH)：玛的培养基使其终浓度分别为10，50，1130 d．6 后分别培养2d、4 d，再加入MTrl5叫孔(浓度为75％)，37℃培养箱中放置4h，终止培养， nm测 吸弃培养孔内上清液，每孔加入150m的二甲基亚枫，震荡摇匀，在酶标仪上以波长490 各孔吸光度，结果以各组5孔0D均值±标准差(；4-，)表示。计算其对细胞增殖的毒性以抑 制率来反映，其抑制率(m)的计算公式为： 细胞抑制率(％)=盟煎鱼{黑莲子焘铲×100％ (三)平板克隆形成试验 取对数生长期的细胞以每孔300个接种于24孔板中，于培养箱中培养20h。把培养液分 别换成空白对照液和不同浓度的l，25一(oH)：D3使用液，在分别培养2d，4d和6d。然后将 d。弃去培养液，用PBS 培养液换成含10％小牛血清的1540培养液，继续培养10—14 (O．01 mln。弃去固定液加适量姬萨染色lO一 nml／L，pH7．4)小心浸洗两次。甲醇固定15 作者单位：710033西安，第四军医大学病理学教研室 1．25一(OH)：现对人肝癌细胞增殖的影响 183 30 rain，然后流水缓慢洗去染色液，空气干燥。计算每孔的克隆数。50个细胞以上者算一千 隆，并按下式计算克隆形成率。 克隆形成率(％)= 数聂 ×100％ 平覆塑种童细 噬胞 抑制率； ×100％ (四)细胞生长曲线的绘制 取对数生长期的细胞以每孔2×104个接种于24孔板中，于培养箱中培养20h。把培薪 分别换成空白对照液和不同浓度的l，25一(OH)：乌使用液，继续培养5d。每天换液一次， 将空白组和实验组细胞各消化5孔，台盼蓝染色，置血球计数板内计数活细胞数。以每天活 胞数均值绘制生长曲线，及计算1，25一(OH)：D3对肝癌细胞的抑制率。 细胞抑制率(％)= ×100％ (五)饼姨提取及凝胶电泳检测‘51 常规方法提取细胞总DNA，1．8％琼脂糖凝胶电泳检测。 (六)统计学分析 SPSSl0．0统计软件，用F检验而后对实验组及对照组进行比较。 结 果 (--)1．25一(OH)：现对HHCC细胞增殖的影响《裹l。2)