中药异位宁对子宫内膜异位症大鼠模型异位内膜实验研究.pdfVIP

世界中医药学会联合会妇科专业委员会第四届中医妇科国际学术大会论文集 中药异位宁对子宫内膜异位症大鼠模型异位内膜的实验研究 徐晓宇I 丛慧芳1，马文光2，马宝璋2 1黑龙江中医药大学附属二院妇科，哈尔滨 150001； 2黑龙江中医药大学附属一院妇科，哈尔滨 150040 目前，关于EM的发病机制尚未完全阐明。研究证明，在己成功种植的病灶周围及异位内膜间 质部存在丰富的血管，提示血管形成对EM的发生发展有重要作用。近年研究证实，高表达的环氧 异位内膜组织中的表达，探讨其与EM发病的关系及异位宁治疗EM的作用途径和机制，以期为临 床治疗提供新的思路。 1材料与方法 1．1实验动物 Wistar雌性成年未孕大鼠，体重200士209(黑龙江中医药大学实验动物中心提供)； 1．2药物与试剂 异位宁由赤芍、柴胡、莪术、元胡、蜈蚣、金银花、薏苡仁、牡蛎组成。上药共计20瞻，充分 置水浴锅提取乙醇，取药液40ml，相当于每毫升含生药5．Og，置4C条件备用(黑龙江中医药大学 盒(武汉博士德生物工程有限公司提供)。 1．3方法 1．3．1造模 采用自体子宫组织块移植法建立EM大鼠模型。术前皮下注射乙烯雌酚0．2mg／P,促情。以20％ 乌拉坦1．59糸g腹腔麻醉，待麻醉满意后，将大鼠固定于操作台上，腹部剪毛，碘伏消毒，在无菌条 件下开腹。取下腹正中切口长1．5cm，进入腹腔后，左侧距卵巢0．5cm处分离子宫，结扎后在子宫 中间剪取2cm，纵形剖开宫腔剥离内膜，将剥离的内膜剪成等大三块，分别缝合于子宫分叉处、右 侧卵巢附近、右侧腹膜壁层，逐层关腹缝合。术后每鼠腹腔连续3天注射庆大霉素0．1ml，正常清洁 饲养。 1．3．2分组与取材 正常饲养1月后，随机抽取lO只造模大鼠，再次开腹，经大体及病理切片显示造模成功后，随 机分组，每组9只，开始给予灌胃给药。正常对照组：正常雌性鼠每日灌服等容量蒸馏水；模型组： 造模术后每鼠每日灌服等容量的蒸馏水；异位宁高剂量组：造模术后每鼠每日以5．4酊009灌服异位 宁药液；异位宁低剂量组：造模术后每鼠每日以1．8酊009灌服异位宁药液；西药对照组：造模术后 每鼠每日以3．6mg／1009灌服达那唑混悬液。各组给药4周后断头处死，剖取大鼠在位及异位子宫内 膜组织放入10％福尔马林中固定，常规石蜡包埋，6肚m厚度连续切片，以备原位杂交。 1．3．3 COX．2mRNA检测 世界中医药学会联合会妇科专业委员会第四届中医妇科国际学术大会论文集 实验步骤严格按试剂盒说明书进行，实验所用溶液均加入lml／L二已基焦碳酸(DEPC)灭活 RNA酶，8小时后高压灭菌备用，整个实验过程严格在无核酶环境下进行，防止核酶污染造成假阴 性结果。用不含探针的硝酸盐缓冲液(PBS)代祷杂交液作为染色的阴性对照，用已知的阳性切片 做阳性对照。 1．3．4结果判定 采用双盲法，高倍显微镜下观察细胞着色情况，每张切片随机观察5个视野，COX．2阳性细胞 染色均呈棕黄色。按阳性细胞胞浆表达染色强度判定，不着色为阴性(一)，浅棕黄色为弱阳性(+)， 深棕黄色为强阳性(+++)，介于弱至强阳性之间为中度阳性(++)。为了统计方便，予以半定 量计分：0、l、2、3分别对应(一)、(+)、(++)、(+++)。 1．2．5统计学方法 采用SPSSl0．0统计学软件，等级资料采用秩和检验。 2结果 2．1大鼠局部组织COX．2mRNA表达结果 COX-2 mRNA主要表达在腺上皮细胞的胞浆中，模型对照组COX．2mRNA阳性表达显著增高， 表达，尤以高剂量组为佳，与模型组比较有显著性差异(P0．01)。(见表1) 表l各组大鼠局部组织COX．2mRNA表达结果 }与模型对照组比较P0．0l枣枣与模型对照组比较P0．05． 3讨论 是COX的一种同工酶。在正常在位子宫内膜，COX．2被认为与细胞增殖、促进血管内皮生成和抑制 免疫监视有关。Ota等【2】研究表明，在正常人子宫内膜上皮和腺上皮中COX．2表达随月经周期变化明 显，增生早期最低，后逐步升高，分泌期维持高水平；在内异症患者中，COX．2在腺上皮的表达亦 随月经周期而变化，但较正常入高。内异症的异位病灶COX．2高活性、高表达的可能机制：首先， 雌激素可能直接或间接调节COX-2的表达及活性，刺激PG的产生，建立一个正反馈循环；其次，异 位灶