锌对猪肠道上皮细胞系pBD1、2、3基因表达影响.pdfVIP

340 02009年学术年会 T010024 锌对猪肠道上皮细胞系pBDI、2、3基因表达的影响毒 齐莎日娜 陈金永余冰陈代文张克英“ (四川农业大学动物营养研究所动物分子营养教育部重点实验室四川雅安625014) 摘要：目的：防御素(defesin)是抗菌肽家族的主要成员．目前对猪防御素表达影响的研究主要集中在细菌、病 毒等方面，关于营养素对其表达影响的研究十分少见．本研究旨在研究揭示锌是否能调节猪空肠上皮细胞系IPEC-J2的 PCR D一防御素的表达。方法：将细胞在不含血清但添加不同浓度锌的培养基中培养12h后，提取RNA，反转录，用Real-time 测定B一防御素1，2和3 2和3蛋白含量．结果：结果表明，锌不同程度的诱导D一防御素1、2和3mRNA表达和蛋白产生．结i6．锌对猪肠道上皮细 胞系IPEC-J2的pBDI、2，3的表达具有正向调控作用． 关键词：锌；D一防御素；IPEC-J2 免疫系统是机体应防御需要而逐渐进化而来，包括特异性免疫和非特异性免疫。其中，非特异性免 疫是宿主防御病原体入侵的第一道防线，在保护生物生存方面发挥着重要的作用fIJ。非特异性免疫的机 空间排列、六个半胱氨酸的分布、连接和分泌部位的不同，将其分为三种类型：n．防御素(1H6、2*-,4、 还未发现a和0一防御素。据报道，通过生物信息学方法鉴定，在猪体内共编码了11种p．防御素，这些猪p 防御素基因被命名为：pBD—l、pBD．2、pBD．3、pBD．4、pBD．104、pBD．108、pBD．114、pBD。123、pBD．125、 菌、病毒等方面，营养素对其表达影响的研究十分少见。而在其他物种上也仅有少量关于营养素对防御 皮细胞D．defensin基因表达14J。2005年，用人HCT．116细胞，HadasSherman等研究表明：精氨酸、异亮 皮细胞系IPEC-J2中的表达。 1材料与方法 1．1细胞培养 胎牛血清、100U／mL青霉素和100 ·基金项目：十一五国家科技支撑计划(2007BAD5IB04)。 ··通讯作者：张克英，教授，博士生导师，主要从事“家禽营养”、。营养与免疫”等领域的研究，E-mail：zkeying@yahoo．com。 优秀论文提名奖论文蟋》 341 培养12h后移去培养液，用PBS缓冲液冲洗两次，提取RNA和做细胞ELISA。 1．2 I—ti mePCR RNA提取和Rea 用RNAiso I(Life Technologies，美国)处理，去除DNA污染，用RT PCR反应。 防御素：pBD一1、2和3的Real—time 引物由大连宝生物工程公司合成，引物序列见表1。 ReaI-time 表1 PCR引物序列 PCR MasterMix(天根生物，中国)，体系用推荐体系。 扩增片段重组质粒的构建PCR反应用2xTaq 反应条件：94C预变性3min，94C变性30 min， 72℃延伸30S，40个循环，72℃延t,5min。PCR纯化采用乙醇沉淀法，连接与转化按说明书操作，并 梯度，置于．20℃保存做标准曲线用。 Real-timePCR SYBRGreen PCR反应体系包括：2．0cDNA，1．0 259L pL laL正向引物(100pM)， 1．0