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植物雄性不育分子标记研究进展
张 鹤,路翠玲,刘卫红
(郑州市蔬菜研究所,郑州450015)
摘要:介绍了分子标记的种类及其特点和分子标记在油菜、白菜、甘蓝等作物雄性不育研究上的应用。
关键词:分子标记;雄性不育;白菜;甘蓝
生物技术的发展给作物遗传育种研究带来了巨大的变化,DNA分子标记技术的应用是其中最显
著的变化之一。由于分子标记相对于经典遗传育种研究中的形态性状具有无可比拟的优越性,它的应
用也越来越广泛。许多以前无法进行的研究,比如环境因素的影响,数量性状的多重效应等等,在分子
标记的帮助下已经开展。同时分子标记直接应用于辅助选择育种的研究,在育种过程中利用分子标记
技术进行鉴定、检测,帮助亲本选择和品种的选育。成为分子育种这门新兴学科中的重要组成部分。虽
然使分子标记成为育种家的一种常规手段尚需相当长的一段时间,但是可以从它的发展速度与趋势,
看到其中所蕴含的巨大潜力与应用价值。
1 分子标记的种类及其特点
分子标记即直接从DNA水平上进行遗传分析,因此又叫DNA分子标记。近十年来,在人类基因
组研究计划的推动下,分子标记的研究与应用得到了迅速发展,从目前已掌握的大量文献中分析可以
看出,它与传统遗传标记相比,具有诸多优越性(王水飞,2001):1、直接以DNA的形式表现,在植物体
的各个组织、各发育时期均可检测到,不受季节环境限制,不存在表达与否的问题;2、数量极多。遍及整
个基因组;3、多态性高,自然存在着许多等位变异,不需专门创造特殊的遗传材料;4、表现为中性,即不
影响目标性状的表达,与不良性状无必然的连锁;5、有许多分子标记现为共显性,能够鉴别出纯合基因
型与杂合基因型,提供完整的遗传信息,因而现已逐渐形成了许多新的分子标记系统。目前,应用较多
的分子标记主要有RFLP、RAPD、ISSR、SSR、AFLP等,其原理和特点分述如下:
1.1 限制性片段长度多态性(RestrictionFragmentLengthPolymorphism,RFLP)
RFLP(Restriction
FragmentLength
交,通过标记上的限制性酶切片断大小来检测遗传位点的多态性。该标记具有以下优点:无表型效应,
不受环境影响;呈简单的共显形遗传,可以区别纯合基因型与杂合基因型;在非等位的RFLP标记之间
不存在上位效应,互不干扰。但是RFLP同时也具有需要DNA含量大、检测步骤繁琐、需要仪器较多、
成本昂贵等不足之处。
1.2 随机扩增片段长度多态性DNA(RandomlyAmplifiedPolymorphismDNA。RAPDl
DNA)
1990年Williams和Welsh等各自独立发明了RAPD(Random
AmplifiedPolymorphism
检测技术,其分析的原理是采用合成的较短的单个随机引物(最常用10个碱基)DNA进行非定点PCR
扩增,每一条扩增产物带即代表基因组上的一个位点,每一个引物只能检测基因组特定区域DNA多态
性,但一系列引物可使检测区域扩大到整个基因组。因此,扩增片段的多态性便反映了基因组相应区
域的DNA多态性。
RAPD标记的优点是操作简单、应用方便、检测快速,多态性丰富;不需要预先知道待检验基因组
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的序列;实验技术只是建立在PCR的基础上,不需要分子杂交技术;所用DNA等量少,节约成本。该
方法的缺点主要有两点:(1)多数位点的标记带表现为显性的特点,因此不能提供完整的遗传信息。
(2)更主要的是该方法在一些作物上扩增产物的稳定性差。解决这一问题的方法之一是,通过控制模
板DNA和M92+浓度及严格保证反应条件来解决;二是将RAPD作为初步筛选鉴定的一种方法,一旦
将RAPD转变成经典的PCR的方法。
1.3 Sequence
简单序列重复(Simple Repeat。SSR)
主要来源于重复次数的不同或重复程度的不完全性。SSR标记的基本原理是,根据SSR两端的保守序
列设计引物,通过PCR反应扩增SSR片段。由于核心序列串联重复数目不同,因而能够用PCR的方
法扩增出不同长度的PCR产物,将扩增产物进行凝胶电泳,根据分离片段的大小决定基因型并计算等
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