甲胎蛋白异质体检测方法地研究进展.pdfVIP

可以改善肿瘤标志物的诊断价值。CYFRA21—1与CEA联合检测鳞癌、腺癌和小细胞癌时也能得到 期、Ⅱ期、Ⅲ期的表达水平低于其在Ⅳ期的表达水平，有统计学意义(PO．05o通过手术治疗，可 o 结论：联合检测NSCLC患者TM、CD以及细胞因子并综合分析对肿瘤分型和分期等临床诊断有一定 的价值，联合检测优于单项检测。 【关键词】非小细胞肺癌，肿瘤标志物，白细胞表面分化抗原，细胞因子，联合检测 甲胎蛋白异质体检测方法的研究进展 王晶晶 张立群蒋栋能蒲晓允 第三军医大学第二附属医院检验科 基金项目：重庆市科技攻关重点项目(CSTC，2011AB5035)； 就将其作为肝脏恶性肿瘤的标志物。AFP是诊断肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma．HCC)最常用的肿 瘤标志物，但研究显示临床有相当多的慢性肝炎和肝硬化患者与早期HCC患者血清中的低浓度AFP 呈重叠分布，使得AFP在上述三种疾病的鉴别诊断中存在争议，即AFP在HCC的早期诊断中存在特异 性不高等问题。在对AFP的深入研究过程中，有研究报道，不同病变的组织细胞在合成分泌AFP的过 程中，由于细胞特性以及所处的生理与病理状态不同，各种N糖链加工酶的活力也各不相同，导致合 几年研究发现，AFP异质体尤其是AFP—L3，在肝癌的早期诊断、鉴别诊断、疗效评估和预后监测等 方面均具有较高的特异性与敏感性。2005年FDA正式批准将AFP—L3作为原发性肝癌的标志物之一。 本文就AFP—L3的最新检测方法研究进展作一综述。 1甲胎蛋白异质体的检测方法 豆凝集素PSA)结合能力的不同进行分离，然后应用免疫学方法进行定量测定。经典免疫技术(免 疫荧光技术、放射免疫技术及免疫酶技术)的不断发展，使AFP—L3的检测技术和检测方法得到不断 发展。 1．1亲和免疫交叉电泳技术 1．1．1考马斯亮蓝法：双向电泳后的标本直接用考马斯亮蓝染色，洗脱后观察峰带。此法简单， 但干扰因素多且严重，显带图像不清晰，灵敏度差。 1．1．2放射自显影法：在第一相电泳后的样品中，加入微量123I标记的AFP，再进行第二相电泳， 然后用x线感光胶片显影。其主要优点是显影图像清晰，灵敏度高，重复性好。此法经研究人员的不 断改进和摸索，已成为标准化的方法，但操作仍较繁琐，且需特殊装置和材料，有同位素污染。 1．1．3酶标法：先进行电泳，电泳毕将蛋白转印到硝酸纤维膜或尼龙膜上，再用酶标抗体或核素 标记抗体等标记物显色进行测定，此法可使检测的灵敏度得到极大的提高，达50ng／mL。目前已有 商品化的试剂盒供应。 ·337· A 1．1．4金银染色法(proteingold—silver 术应用于亲和电泳的显色过程。即将双向电泳后的标本直接与金黄色葡萄球菌蛋白A一胶体温育，再 用银显色液显色。该法所得峰带清晰，灵敏度可达32．5 n咖L，操作简便，避免接触放射线或致癌物。 1．2亲和印迹法 1985年由武田和久创立，后被改进为凝集素亲和电泳一免疫印迹法，基本原理是：根据来自于不 同疾病状态的AFP分子与凝集素结合的亲和力不同，通过电泳将AFP分成若干条带．转移至AFP抗体 包被的硝酸纤维膜(NC膜)上，使分离带在Nc膜上显色。来自于良恶性肝病的AFP分子通常可分成 果与凝集素亲和免疫电泳自显影法完全一致，鉴别诊断良恶性肝病的临床价值也得到验证。该方法 所需时间较短(仅5～6 h)、重复性好、灵敏度较高(检测限在20¨dE上)，可同时检测10份样本。 1．3亲和层析法 首先制备亲和层析柱，方法是先将植物凝集素与琼脂糖等载体交联，然后装柱。测定时将待检样 品过柱，此时交联的凝集素会与糖链特异性结合，再用缓冲液洗脱，收集洗脱液测定其含量，即可得 至tJAFP异质体的含量。该方法的优点为重复性好、层析柱可反复使用。缺点是速度缓慢，不适合批 4B亲和层析柱吸附AF