益气化瘀补肾方对大鼠慢性脊髓损伤后影响实验研究.pdfVIP

海峡两岸中医药发展大会 Conferenceonthe ofTraditionalChineseMedicine Cross—Strait Development 益气化瘀补肾方对大鼠慢性脊髓损伤后影响的实验研究 谢兴文1施杞2王拥军2 1．甘肃省中医院兰州7300502．上海中医药大学脊柱病研究所上海200032 脊髓型颈椎病(CSM)严重危害中老年人的健康，随着我国人口的老龄化，其患病率有逐年增加的趋势，加 强对该病的研究有重要意义。普遍认为该病的早期应当进行6个月的非手术治疗，中医药对防治CSM有一定的疗 效，方法简便，成本低，副作用小。目前急需开发出疗效确切、服用方便、毒副作用小的中成药制剂，以满足患 者的需要。研究已经证实脊髓损伤后主要发生以下的病理改变：①压迫区脊髓组织坏死、液化、囊性变；②压迫 区神经细胞和胶质细胞的凋亡，这是慢性损伤的主要因素；③局部炎症反应，可加重脊髓损伤；④脊髓缺血性改 变等．可见抑制炎症反应、减少细胞凋亡、促进神经营养因子分泌是非手术治疗的重点研究范围。益气化瘀补肾 方是导师施杞教授的经验方，长期临床观察发现它可明显缓解CSM患者症状，延缓病情的发展。进一步研究其作 用机理，明确疗效，可为开发新药打下基础。 材料和方法 性。其中230只采用眼科平头螺丝钉前路压迫，压追后出现急性损伤者，排除于实验外，压迫1月后采用BBB(Basso, Bresnahanlocomotor Be删e,and scale)功能评分分级【lJ，最终筛选出轻度损伤大鼠68只，中度损伤大鼠54 rating 只。将轻度组和中度组大鼠随机抽取36只和24只，并随机分为3组，轻度组每组12只，中度组每组8只：即模 型组、益气化瘀补肾方组、弥可保组． 2模型制作氯胺酮100mg·Kg．1腹腔注射麻醉后，取颈前外侧入路，从胸锁乳突肌前缘的肌间隙进入，剪 开椎前筋膜后向两侧分开。向下充分暴露第7颈椎椎体，将平头螺丝钉完全拧入椎体(拧入长度为4．1mm)。切 口中注射庆大霉素0．3ml，逐层缝合筋膜和皮肤。术后抗菌4d．喂养4周后进行BBB功能评分． 3药物及用法黄芪、党参、川芎、丹参、补骨脂、肉苁蓉共759，水煎，每贴药浓缩为80ml，按每只大鼠 饲养条件为龙华医院科技中心SPF级动物房(室温25℃，湿度60度)． 4取材氯胺酮100mg·Kg-1腹腔注射处死动物，以压迫点为中心取脊髓组织1．Sere，取材后放进液氮中，后 转入．80℃冰箱中保存，备用。 FAl004N型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)、MultiskanMK3酶标仪 5主要仪器、试剂HangPing (Germany生产)、新芝DY一89．1型电动玻璃均浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司生产)。以上仪器均由 chemical 上海中医药大学脊柱病研究所提供。sPLA定量分析试剂盒2个(Cayman 取试剂盒、revertAidM．MulV逆转录酶试剂盒、SYBR@greenPCR试剂盒、氯仿、异丙醇、75％酒精(经过DEPC 水处理)、D班，C处理的水。 6检测方法 6．1ELIAS将16叽『，mI，的标准品按逐级稀释的方法稀释至形成5II／mI，的浓度，取两个96孔酶标板，严格按 照试剂盒说明操作，最后用酶标仪在405rim测定光吸收OD值，并根据标准品由酶标仪自动计算出各孔的浓度． 6．2RT-PCR 作手册，反应体系为20lIL，逆转录与PCR二步完成，扩增产物5pL加样子1％的琼脂糖凝胶，常规电泳，紫外透射仪 186 海峡两岸中医药发展大会 墅盟鲤!墅墅竺婴些里竺!婴翌型211型!皇竺型竺坐坐坚鲤!堂 7- 7．AmCATACTrCGGTrGC一3 游，5’-G℃CATCC】f