16年高中生物 专题1.1 DNA重组技术的基本工具课件 新人教版选修3.pptVIP

基因工程中常用载体——质粒 1．来源：质粒主要存在于细菌、酵母菌等生物中。 2．结构：是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并且具有自我复制能力的双链环状DNA分子，如图所示： 3．标记基因：质粒上有一些特殊的基因，如抗四环素基因、抗氨苄青霉素基因，用于对重组DNA进行鉴定和选择。 4．载体的作用 (1)用它作为运载工具，将目的基因送入受体细胞中去。 (2)利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。 5．限制酶的选取原则 限制酶识别的切割位点，不能在载体的复制起始点、标记基因等载体必需的基因片段，切点所处位置必须在载体需要的基因片段之外，避免载体因目的基因的插入而失活或影响鉴定和筛选。 特别提醒　细胞膜上的载体与基因工程中的载体的区别 (1)化学本质不同：细胞膜上的载体的化学成分是蛋白质；基因工程中的载体可能是物质，如质粒(DNA)、λ噬菌体的衍生物，也可能是生物，如动植物病毒等。 (2)功能不同：细胞膜上的载体功能是协助细胞膜控制物质进出细胞；基因工程中的载体是一种“分子运输车”，把目的基因导入受体细胞。 目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图所示。 (1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于___________________________________________________。 (2)pBR322分子中有单个EcoR Ⅰ限制酶作用位点，EcoR Ⅰ只能识别序列—GAATTC—，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR Ⅰ的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR Ⅰ切割后所形成的黏性末端： ___________________________________________________。 筛选(鉴别)目的基因是否导入受体细胞 (3)pBR322分子中另有单个的BamH Ⅰ限制酶作用位点,现将经BamH Ⅰ处理后的质粒与另一种限制酶Bgl Ⅱ处理得到的目的基因,通过DNA连接酶作用恢复__________键，成功获得了重组质粒，说明___________________________________________________。 磷酸二酯　 两种限制酶(BamH Ⅰ和Bgl Ⅱ)切割得到的黏性末端相同 (4)为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是___________________________ _________图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是________________________________________________。 能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素 pBR322质粒 [解析]　(1)质粒作为基因表达载体的条件之一是要有抗性基因，以便于筛选(鉴别)目的基因是否导入受体细胞。(2)同一限制酶切割DNA分子产生的黏性末端相同，根据题意可知:该目的基因两侧被限制酶EcoR Ⅰ切割后所形成的黏性末端为： (3)DNA连接酶催化两个DNA片段形成磷酸二酯键；而通过DNA连接酶作用能将两个DNA分子片段连接，表明经两种限制酶(BamH Ⅰ和BglⅡ)切割得到的DNA片段，其黏性末端相同。(4)由题意知：由于与图三空圈相对应的大肠杆菌能在含氨苄青霉素的培养基上生长，而不能在含四环素的培养基上生长，故可推知与图三空圈相对应的图二中的菌落能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素。由图二、图三结果显示，多数大肠杆菌都能抗氨苄青霉素，而经限制酶BamH Ⅰ作用后，标记基因tetR 被破坏，而不能抗四环素，故多数大肠杆菌导入的是pBR322质粒。 图一中有多个限制酶作用位点，对生物本身有何作用？在基因工程中有何好处？ 提示：防止外源DNA入侵细菌，是一种自我防御；在基因工程中可供目的基因插入其中。 基因工程中,需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒,便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是 —G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是 —↓GATC—。根据图示判断下列操作正确的是(　　) A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割 B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割 C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割 D 解析：首先把目的基因切下来要用到