细胞内细胞因子染色用FITC标记抗马γ-干扰素单抗的研制与应用.pdfVIP

中国畜牧兽医学 畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学 兽医免疫分 第七次研讨 会论文集 细胞内细胞因子染色用FITC 标记 抗马 γ- 干扰素单抗的研制及应用 白 宇，张维军，童铁钢，吴东来* ( 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001) 摘 要：本研究制备细胞内细胞因子染色用FITC 标记抗马- 干扰素单克隆抗体，建立马IFN-酌 细胞内细胞 因子染色方法，为马传染病的免疫学研究提供新方法。利用荧光素 FITC 对纯化后的抗马IFN-酌 单克隆抗体 (SB 10)进行标记，对马外周血单核细胞进行胞内细胞因子IFN- 酌 单染色的流式细胞术检 ，并且与商品化的 FITC 标记抗牛IFN- 酌 单克隆抗体(CC302)进行对比试验，结果表明FITC 标记的单抗能够有效的对刺激的马外 周血单核细胞进行细胞内流式检 。制备 FITC 标记的抗马IFN-酌 单克隆抗体为建立马细胞免疫学研究方法奠 定物质基础，马IFN-酌 胞内染色方法的建立为监 机体免疫状态和研究机体免疫机制提供技术平台。 关键词：马伽玛干扰素；细胞内细胞因子染色；荧光素标记单抗 细胞因子检测在临床上有广泛的用途，如评估 γ- 干扰素(IFN- γ)是机体内具有抗病毒、抗肿 机体免疫状态、检测疾病的预后和治疗、病理变化 瘤和免疫调节功能的重要细胞因子， 要由激活的 和损伤机理的研究以及辅助诊断等。目前，检测细 、 [2] ， T 细胞 NK 细胞和巨噬细胞产生 。研究表明 内 胞因子的方法很多， 要有生物活性测定法、免疫 源性IFN- γ水平的高低在很大程度上可以反映机体 学测定法和利用核酸标记技术检测细胞因子mRNA 的细胞免疫状态，对样本中的IFN- γ进行定量分 [ 1] 流式细胞 ， 、免疫功能分析、疫苗免疫效 表达等 。随着单克隆抗体技术的发展， 析 在免疫机制研究 仪检测技术已经广泛应用在基础和临床实践的各个 果评估、器官移植、过 反应以及多种胞内病原感 、肿瘤 、血 、 方面，包括细胞生物学 学 液学 免疫 染的诊断等方面都具有极其重要的理论价值和应用 [3] 、 学、药理学 遗传学及临床检验学等领域，对许多 价值 。由于IFN- γ在抗感染、调节免疫功能等方 学科的发展发挥了重要作用。由于流式细胞术可以 面的重要意义，基于抗原特异性的IFN- γ反应可用 补充ELISA 和ELISPOT 检测的不足，因此在检测细 于 价机体特异性细胞免疫状态的原理，特异性抗 胞因子中得到了广泛的应用。近年来研究表明：大 原刺激的外周血单核细胞IFN- γ体外释放试验已被 部分细胞因子的产生具有多源性，而且各种克隆的 广泛用于抗感染诊断。 价IFN- γ在机体内的动态 ， ，对 、发展、 T 细胞产生的细胞因子及其功能也各不相同 因而 变化水平指标 了解传染性疾病的发生